[发明专利]一种提高人参皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺

权利要求书

1.一种提高人参中皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺，其特征在于，该工艺包括如下步骤：

1）制备种子液

里氏木霉（Trichoderma reesei），保藏编号为：CICC2626，在含10-20%马铃薯提取物和1.5-2.0%葡萄糖的培养液中培养，获得里氏木霉种子液；

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），保藏编号为：CCTCC NO:M 2020002，在LB培养基中培养，获得枯草芽孢杆菌种子液；

2）制备发酵培养基

发酵培养基为液体发酵培养基或固体发酵培养基；该液体发酵培养基是按照1000 ml的水中加入2.0-5.0 g葡萄糖、200-250 ml马铃薯提取液、0.3-0.5 g KH₂PO₄、0.3-0.5 gMgSO₄ 的比例混合而成；

3）加入氮源；

在该发酵培养基中加入氮源，氮源的添加量为0.2-0.5 g/100 mL；

4)人参基质的粉碎

将人参根或叶进行机械粉碎，过120-500目的筛子；

5）加入人参粉

在该液体发酵培养基中加入人参粉，人参粉的添加量为0.5-3.2 g/100 mL；固体培养基组分中人参粉的添加量为10-30g/100mL；

6）菌株接种

在加入了氮源和人参粉的发酵培养基中加入菌株进行接种，菌株接种量设定为发酵培养基的5-30% v/v，所述菌株包括枯草芽孢杆菌种子液和里氏木霉种子液，枯草芽孢杆菌种子液：里氏木霉种子液为1:4-2:1；发酵温度保持在20-40℃，发酵培养基pH值调整到5.0-7.0；

在步骤6）中，接种后，110-130 rpm搅拌速度下好氧或通气培养和发酵，每100g人参发酵基质的无菌通气量为0.3-0.7L/min。

2.根据权利要求1所述的一种提高人参皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺，其特征在于，在步骤6）中，加入枯草芽孢杆菌种子液和里氏木霉种子液进行同步接种，同步接种是指将枯草芽孢杆菌种子液和里氏木霉种子液同时接种到发酵培养基中共培养90-130 h。

3.根据权利要求1所述的一种提高人参皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺，其特征在于，在步骤6）中，加入枯草芽孢杆菌种子液和里氏木霉种子液进行分段接种，枯草芽孢杆菌种子液首先接种到发酵培养基中培育30-40 h,然后将里氏木霉种子液接种到发酵培养基中再共同培养90-140 h。

4.根据权利要求1至3中任一项权利要求所述的一种提高人参皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺，其特征在于，在步骤3）中，所述氮源为尿素、酵母膏、玉米浆、牛肉膏中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的一种提高人参皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺，其特征在于，在步骤1）中，LB培养基中含有0.5-1.0%酵母膏、1.0-2.0%蛋白胨、0.5-1.0% NaCl、1.8-2.0%琼脂 w/v；枯草芽孢杆菌在37℃下100-220 rpm搅拌速度的LB培养基中好氧或通气培养24小时获得枯草芽孢杆菌种子液。

6.根据权利要求4所述的一种提高人参皂苷产量的好氧共培养益生菌发酵工艺，其特征在于，在步骤1）中，里氏木霉在30℃下100-220 rpm搅拌速度的培养液中好氧或通气培养48小时获得里氏木霉种子液。