[发明专利]一种Cap2结构5′帽子类似物及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202110601446.X | 申请日： | 2020-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN113416762A | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 胡勇;张苗苗;洪丹;胡迅 | 申请（专利权）人： | 深圳市瑞吉生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C07H21/02 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 张梦泽 |
| 地址： | 518064 广东省深圳市南山区粤海街*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cap2 结构 帽子 类似物 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种Cap2结构5'帽子类似物，其特征在于，所述Cap2结构5'帽子类似物的分子为3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)p(2'OMeA)。
2.权利要求1所述的Cap2结构5'帽子类似物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将2'-O-Methyl-GTP溶解在无RNA酶的水中，再分别与磷酸水解酶、2×ReactionBuffer混合后进行孵育，得到2'-O-Methyl-GDP；
2)将所述步骤1)得到的2'-O-Methyl-GDP溶解在无RNA酶水中，再与7-Methyl-3'-O-Methylguanosine、鸟苷转移酶、2×Reaction Buffer混合后进行孵育，得到3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)；
3)将所述步骤2)得到的3′-O-Me-m7G(5')ppp(5')(2'OMeG)溶解在无RNA酶水中，与T4RNALigase1混合后，再与2'-O-Methyl-ATP混合，再与2×T4RNALigase Reaction Buffer混合后进行孵育，得到Cap2结构5'帽子类似物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)2'-O-Methyl-GTP的摩尔与无RNA酶的水的体积比为1～30mmol:14μL；所述步骤1)无RNA酶的水与磷酸水解酶、2×Reaction Buffer的体积比为14:1:15。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸水解酶的酶活为50000U；
所述2×Reaction Buffer的组分包括：50mM Tris-HCl、5mM KCl、1mMMgCl 2、1mM DTT，pH值为8。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)～3)孵育的温度分别为37℃，所述孵育的时间分别为1h。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2)无RNA酶水与7-Methyl-3'-O-Methylguanosine、鸟苷转移酶、2×ReactionBuffer的体积比为11:10:1:22。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3)无RNA酶水与T4RNALigase 1、2×T4 RNALigase Reaction Buffer的体积比为11:1:22。
8.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述2×T4RNALigaseReactionBuffer的组分包括：60mM Tris-HCl、20mM MgCl 2、20mMDTT和2mMATP。
9.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述T4 RNALigase1的酶活为10000U。
10.权利要求1所述的Cap2结构5'帽子类似物在mRNA合成中应用。
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