[发明专利]一种促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法、缓释微球及其应用

权利要求书

1.一种促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法，其特征在于：步骤S1，制备获取微球溶液；

步骤S2，制备获取微流控的流动相溶液；

步骤S3，提取间充质干细胞分离获取外泌体溶液，经过净化处理后与步骤S1中所制备的微球溶液进行混合配置获取微流控的分散相溶液；

步骤S4，通过将步骤S2取得的流动相溶液以及步骤S3取得的分散相溶液分别通过微流控芯片制备取得促软骨修复外泌体缓释微球。

2.根据权利要求1所述的促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法，其特征在于：所述步骤S1包含有；

步骤S1-1，分别称取甲基丙烯酸酰化明胶和聚乙二醇(二醇)二丙烯酸酯，各加入到预热至T温度的双蒸水中分散，获得甲基丙烯酸酰化明胶溶液和聚乙二醇(二醇)二丙烯酸酯溶液；

步骤S1-2，以摩尔等份计，A1等份的甲基丙烯酸酰化明胶溶液和A2等份的聚乙二醇(二醇)二丙烯酸酯溶液充分搅拌至均匀后，获得微球混合溶液；

步骤S1-3，将微球混合溶液经过纳米滤膜过滤除菌后静置获取微球溶液。

3.根据权利要求2所述的促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法，其特征在于：所述步骤S2具体为；以体积等份计，将B1体积的司班80加入到B2体积的矿物油中搅拌均匀，静置获取流动相溶液。

4.根据权利要求3所述的促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法，其特征在于：所述步骤S3包含有；

步骤S3-1，选取处于对数生长期的间充质干细胞，当间充质干细胞生长至C1融合度时，更换含无外泌体血清的培养基，继续培养H小时；

步骤S3-2，收集培养基中的细胞培养上清，采用差速离心法提取外泌体溶液；

步骤S3-3，将外泌体溶液经过纳米滤膜过滤除菌后，与所述步骤S1中的微球溶液按照浓度度比为C3进行配置获取分散相溶液。

5.根据权利要求4所述的促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法，其特征在于：所述步骤S4包含有；

步骤S4-1，将装有分散相溶液、连续相溶液分别通过离心管连接注压瓶盖，

注压瓶盖气路接头一端分别连接至微流控压力泵，注压瓶盖液路接头一端连接微流控芯片的对应接口，确保注压瓶盖液路的毛细管下降至离心管底部与分散相溶液、连续相溶液充分接触，打开紫外灯聚光于微流控芯片后段进行除菌处理；

步骤S4-2，通过调节流动相溶液相对压力值、分散相溶液相对压力值进行调控微球的粒径大小，在压力的作用下将分散相溶液与流动溶液相一同挤出；

步骤S4-3，用EP管于微流控芯片的溶液出口处盛接液滴，芯片滴出液滴中含有软骨修复外泌体缓释微球。

6.根据权利要求5所述的促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法，其特征在于：所述纳米滤膜为0.11-0.32μm滤膜；

C3为50～300μg/ml；T温度为35-45℃；

将B1：B2为1：9；A1：A2为1：1；C1融合度为90～100％融合度；

T温度为40℃；

所述纳米滤膜为0.22μm滤膜；H为36-72小时；

分散相溶液相对压力值为60～120，流动相溶液相对压力值为80～140。

7.一种外泌体缓释微球，其特征在于，根据权利要求1至6任意一项所述的促软骨修复外泌体缓释微球的微流控制备方法获取。

8.根据权利要求7所述的外泌体缓释微球，其特征在于：所述外泌体缓释微球直径为50～100um；

9.根据权利要求8所述的外泌体缓释微球，其特征在于：所述外泌体缓释微球包含有微球和外泌体，所述外泌体均匀分布于所述微球球内。

10.一种促软骨修复外泌体缓释微球的应用，其特征在于：所述促软骨修复外泌体缓释微球用于治疗骨关节炎、降低炎症因子造成的软骨细胞损伤、促进软骨组织的再生、改善骨关节炎关节腔内炎症状况、减少炎症因子表达量、进而促进软骨基质合成分泌至少一种。