[发明专利]一种快速选育天麻蜜环菌的方法有效
申请号: | 202110594430.0 | 申请日: | 2021-05-28 |
公开(公告)号: | CN113403202B | 公开(公告)日: | 2023-04-07 |
发明(设计)人: | 贺元川;陈仕江;罗昌树;卫秋阳;邓小书;谭发银 | 申请(专利权)人: | 重庆市中药研究院 |
主分类号: | C12N1/02 | 分类号: | C12N1/02;C12N1/14;G01N30/74;C12R1/645 |
代理公司: | 郑州大通专利商标代理有限公司 41111 | 代理人: | 张立强 |
地址: | 400065*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 快速 选育 天麻 蜜环菌 方法 | ||
1.一种快速选育天麻蜜环菌的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)构建蜜环菌伴栽天麻的天麻素合成的外在评价指标的数学模型;具体为:分离来源于同一原始菌株、不同传代次数的蜜环菌,测定蜜环菌菌株将对羟基苯甲醇转化为天麻素的量,以及同一蜜环菌的伴栽天麻的天麻素含量,然后以生物转化合成天麻素的量为横坐标,伴栽天麻的天麻素含量为纵坐标,构建蜜环菌生物转化合成天麻素的量和伴栽天麻的天麻素含量的数学模型;
(2)测定待测蜜环菌的天麻素合成的外在评价指标,预测该蜜环菌菌种伴栽天麻时天麻中的天麻素含量;
(3)根据步骤(2)中预测的天麻素含量,选择蜜环菌目标菌株。
2.根据权利要求1所述的一种快速选育天麻蜜环菌的方法,其特征在于,分离蜜环菌的操作如下:从蜜环菌菌索顶端0.5cm处进行分离。
3.根据权利要求2所述的一种快速选育天麻蜜环菌的方法,其特征在于,同一蜜环菌选取5株以上菌株。
4.根据权利要求1所述的一种快速选育天麻蜜环菌的方法,其特征在于,蜜环菌蜜环菌体外生物转化的条件为:初始pH4.5,转化液体30mL,蜜环菌静息细胞量6.5g,对羟基苯甲醇3mg/ml,1.5%吐温80,3%葡萄糖,28℃,培养6d。
5.根据权利要求1所述的一种快速选育天麻蜜环菌的方法,其特征在于,蜜环菌静息细胞培养条件为:PDA培养基上23℃培养活化4~6天,将1mL菌悬液体加入到30mL PDA液体培养基,23℃,120rmp培养4天,10000rmp,4℃离心15min弃掉上清,无菌水洗涤2次,收集菌体静息细胞。
6.根据权利要求1所述的一种快速选育天麻蜜环菌的方法,其特征在于,天麻素的定量分析采用RP-HPLC法;C18反相柱,流动相:0.02%磷酸溶液pH=2.6,甲醇体积比为5:95,检测波长220nm,流速0.5ml/min,柱温35℃。
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