[发明专利]多种草鱼重组细胞因子及其制备方法和在协同增强草鱼免疫功能中的应用

说明书

本发明提供多种草鱼重组细胞因子及其制备方法和在协同增强草鱼免疫功能中的应用，属于鱼类分子免疫学技术领域。所述制备方法包括：(1)将草鱼细胞因子目的基因连入载体质粒中构建细胞因子的重组表达载体；(2)将上述重组表达载体导入宿主菌，获得含细胞因子目的基因的重组菌株，诱导重组菌株表达，获得草鱼重组细胞因子；其中，所述草鱼细胞因子包括IFNγ、IL‑4和IL‑1β。本发明通过研究发现，制备得到的IFNγ、IL‑4及IL‑1β重组蛋白可分别刺激草鱼肝脏细胞L8824细胞，同时还能协同促进草鱼pIgR基因表达及培养液上清中pIgR蛋白表达，从而协同增强草鱼免疫应答功能，因此具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于鱼类分子免疫学技术领域，具体涉及多种草鱼重组细胞因子及其制备方法和在协同增强草鱼免疫功能中的应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

IFNγ是是Th1细胞主要分泌的细胞因子，并能指导原初CD4细胞向Th1型细胞分化。IFNγ最大的特点是能够提高巨噬细胞的活性，增强其杀菌能力，达到保护宿宿主的目的。除此之外，它还能促进Ig的转换，增强机体免疫功能，抗肿瘤等多方面的作用。IL-4主要是由Th2细胞分泌，在各个组织中均有分布。IL-4的功能主要体现在维持体内稳态、抑制炎症的恶化以及对寄生虫有较强的抑制作用。IL-1β是一种多效的促炎细胞因子，具有调节代谢作用、造血和免疫学活性，IL-1β作为免疫调控细胞因子具有增强免疫反应的潜力。从已有的研究看来，鱼类IFNγ、IL-4及IL-1β的生物学功能分别和哺乳动物的IFNγ、IL-4及IL-1β存在相似之处。例如重组金鱼IFNγ能增强巨噬细胞的吞噬作用和呼吸爆发作用，还能刺激一些炎症因子和趋化因子的表达；重组斑马鱼IL-4对B细胞增殖有显著的刺激作用，并对抗体产生起到上调作用；重组虹鳟IL-1β体经腹腔注射可有效抵御杀鲑气单胞菌感染；以上研究表明，鱼类的IFNγ、IL-4及IL-1β在免疫调节反应中起到重要的作用。

草鱼具有饲料成本低、价格稳定、经济效益明显等特点，是我国水产养殖的一种优良主养或配养鱼种。为追求经济效益最大化，国内养殖户多采取高密度精养方式，但这一养殖方式却为鱼类的疾病传播，特别是病毒性疾病的暴发提供了便利条件。草鱼对应激反应敏感，在养殖过程中病害频发，死亡率较高，疾病防治成本日益增大。这些因素每年使得草鱼养殖业遭受巨大的经济损失。因此克隆、重组表达和分离纯化草鱼IFNγ、IL-4及IL-1β，研究利用重组草鱼IFNγ、IL-4及IL-1β防治草鱼疾病的方式方法，这种免疫制剂具有的非特异的广谱性抗病活性，使用后不产生有害残留等优点，最符合当今业界所倡导的自然生态、绿色环保的行业标准，同时对其他养殖鲤科鱼类疾病的防治也具有重要的参考价值。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供多种草鱼重组细胞因子及其制备方法和在协同增强草鱼免疫功能中的应用。本发明通过研究发现，制备得到的IFNγ、IL-4及IL-1β重组蛋白可分别刺激草鱼肝脏细胞L8824细胞，同时还能协同促进草鱼pIgR基因表达及培养液上清中pIgR蛋白表达，从而协同增强草鱼免疫功能，因此具有良好的实际应用之价值。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一方面，提供一种草鱼重组细胞因子的制备方法，所述制备方法包括：

(1)将草鱼细胞因子目的基因连入载体质粒中构建细胞因子的重组表达载体；

(2)将上述重组表达载体导入宿主菌，获得含细胞因子目的基因的重组菌株，诱导重组菌株表达，获得草鱼重组细胞因子。

其中，所述草鱼细胞因子包括IFNγ、IL-4和IL-1β。

所述步骤(1)其具体方法包括：