[发明专利]多种草鱼重组细胞因子及其制备方法和在协同增强草鱼免疫功能中的应用有效
| 申请号： | 202110592248.1 | 申请日： | 2021-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN113308487B | 公开（公告）日： | 2022-10-21 |
| 发明（设计）人： | 许国晶;王志忠;张金路;马汝芳;冷春梅;杜兴华;巩俊霞;李壮;田功太 | 申请（专利权）人： | 山东省淡水渔业研究院(山东省淡水渔业监测中心) |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/23;C12N15/24;C12N15/25;C12P21/02;C07K14/57;C07K14/54;C07K14/545;C07K1/22;A61K38/21;A61K38/20;A61P37/04 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 宋海海 |
| 地址： | 250013 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多种 草鱼 重组 细胞因子 及其 制备 方法 协同 增强 免疫 功能 中的 应用 | ||
1.草鱼重组细胞因子IFN γ与IL-4或IFN γ与IL-1β在协同制备促进L8824细胞pIgR基因和/或蛋白表达的药物中的应用；
所述草鱼重组细胞因子IFN γ、IL-4和IL-1β制备方法包括：
（1）将草鱼细胞因子目的基因连入载体质粒中构建细胞因子的重组表达载体；
（2）将上述重组表达载体导入宿主菌，获得含细胞因子目的基因的重组菌株，诱导重组菌株表达，获得草鱼重组细胞因子；
所述步骤（1）具体方法包括：
采用基于PCR 的精确合成法，设计全长拼接引物，在引物的两端各设计了保护性碱基合成基因IFN γGenbank：FJ695519.1、IL-4Genbank：KP896505.1和IL-1βGenbank：JN705663.2，并分别连入载体质粒中；
所述载体质粒为pET-28a，扩展引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1- SEQ ID NO.6所示；
所述步骤（2）中，所述宿主菌为大肠杆菌Arctic Express；
诱导重组菌株表达采用IPTG作为诱导剂进行，诱导诱导重组菌株表达方法为：诱导表达温度为37℃，诱导表达时间为4h诱导剂为IPTG，所述IPTG的添加终浓度为0.5mM；
所述制备方法还包括对获得的细胞因子重组蛋白进行变复性，所述变复性包含洗涤和溶解包涵体的步骤；
所述制备方法还包括纯化步骤，所述纯化方法包括采用Ni柱进行纯化；
IFN γ与IL-4的质量比为0.1~2:1；
IFN γ与IL-1β的质量比为0.1~2:1。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，IFN γ与IL-4的质量比为为1:1。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，IFN γ与IL-1β的质量比为1:1。
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