[发明专利]一种密码子优化的沙眼衣原体ctl0286基因及其应用

说明书

本发明公开了一种密码子优化的沙眼衣原体ctl0286基因及其应用，属于生物医药技术领域。所述密码子优化的沙眼衣原体ctl0286基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过密码子优化策略，实现了大肠杆菌系统中不能表达的沙眼衣原体蛋白CTL0286的体外表达，使用表达蛋白制备的抗体可用于CTL0286蛋白的鉴定；作为沙眼衣原体中未知功能的特有蛋白，本发明可为CTL0286蛋白的功能研究和抗体开发提供基础，进而为临床衣原体治疗和鉴定提供新靶点和药物。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种密码子优化的沙眼衣原体ctl0286基因及其应用。

背景技术

众所周知，基因转录离不开RNA聚合酶的参与，衣原体RNA聚合酶(cRNAP)核心酶中的α、β、β′亚基的同源物均已找到，但直到目前为止，衣原体中是否存在ω因子的功能类似物仍未能得到证实。

衣原体启动子体外转录活性的测定，经常借用大肠杆菌RNA聚合酶(eRNAP)来模拟cRNAP，由此发明人推测衣原体中假如存在ω因子功能类似物的话，那么它与eRNAP的ω因子的同源性应该是相对较高的。

发明人从E.coli K-12菌株MG1655的ω蛋白序列出发，经多步骤Blast搜索Chlamydiae(taxid:204428)数据库，最终发现了沙眼衣原体L2(Ct L2)中潜在的ω因子功能类似物CTL0286。CTL0286是一个迄今为止仍未被研究过的衣原体蛋白，在研究该蛋白的功能之前，需要体外表达得到这个蛋白。

由于ctl0286基因中含有9个E.coli中的aga精氨酸稀有密码子(占ctl0286密码子总数的9％)，导致其蛋白不能在E.coli系统中表达。为此，发明人尝试对ctl0286基因的密码子进行全面优化，构建E.coli中的表达质粒并成功诱导表达CTL0286蛋白。

发明内容

本发明的目的是提供一种密码子优化的沙眼衣原体ctl0286基因，该ctl0286基因可成功表达CTL0286蛋白，同时，CTL0286蛋白作为衣原体特有的蛋白，后续针对该蛋白的抗体研究可为临床衣原体鉴定提供新思路。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种密码子优化的沙眼衣原体ctl0286基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。

一种表达载体，包含上述沙眼衣原体ctl0286基因。

进一步地，所述表达载体为pET28a载体或者pET21c载体。

一种沙眼衣原体CTL0286蛋白的表达方法，包括如下步骤：

(1)合成上述沙眼衣原体ctl0286基因；

(2)构建含有所述沙眼衣原体ctl0286基因的表达载体：

具体地，将所述沙眼衣原体ctl0286基因连接至pET28a载体或者pET21c载体的NdeI/XhoI位点，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，在相应抗性的LB平板上进行抗性筛选，经PCR鉴定，即可得到表达载体；

(3)将所述表达载体转化宿主细胞、表达：

具体地，将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)化学感受态细胞，涂布于相应抗性的LB平板上培养，挑取平板中生长良好的菌落接种于含有相应抗生素的LB液体培养基中培养，然后将培养的菌液接种至不含抗生素的LB液体培养基中，培养至OD₆₀₀＝0.6-0.8，加入终浓度为1mM的IPTG，继续振摇培养。

本发明通过对ctl0286基因密码子的全面优化，可以高表达地获得CTL0286蛋白，可实现CTL0286蛋白功能的研究，也可用于CTL0286抗体的制备。