[发明专利]一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法

权利要求书

1.一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，联合利用GDP-L-岩藻糖合成相关酶和L-岩藻糖基转移酶，催化底物GDP-L-岩藻糖和乳糖反应，合成岩藻糖基化乳糖。

2.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，联合利用GDP-L-岩藻糖合成相关酶和L-岩藻糖基转移酶，催化底物GDP-L-岩藻糖和乳糖反应，合成岩藻糖基化乳糖的过程中，还加入ATP再生酶或GTP再生酶中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，所述GDP-L-岩藻糖合成相关酶选自来源于卵形拟杆菌或脆弱拟杆菌的L-岩藻糖激酶/GDP-L-岩藻糖焦磷酸化酶、来源于大肠杆菌K-12的磷酸甘露糖变位酶、GDP-甘露糖焦磷酸化酶、GDP-甘露糖-4,6-脱水酶或GDP-岩藻糖合成酶中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，所述L-岩藻糖基转移酶选自α-1,2-岩藻糖基转移酶或α-1,3-岩藻糖基转移酶中的一种。

5.根据权利要求2所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，所述ATP再生酶选自多磷酸激酶、丙酮酸激酶或乙酸激酶中的一种或几种；所述GTP再生酶为多磷酸激酶。

6.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，多酶级联催化利用多种不同的酶时，选用同时表达各种酶的重组菌，表达各种酶的重组菌的构建方法包括将相应酶的编码基因构建重组质粒或整合到宿主的基因组上；所选用的酶经重组质粒构建、表达与纯化获得。

7.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，反应体系中含有0.1-0.3mg/mL GDP-L-岩藻糖合成相关酶、0.1-0.3mg/mL岩藻糖基转移酶、1-5mM岩藻糖、1-5mM乳糖、1-3mM ATP、1-3mM GTP，反应pH 6.5-9.5，反应温度20-30℃，反应时间2-12h。

8.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，反应体系中含有0.1-0.3mg/mL GDP-L-岩藻糖合成相关酶、0.1-0.3mg/mL岩藻糖基转移酶、0.1-0.3mg/mL ATP再生酶、1-5mM岩藻糖、1-5mM乳糖、1-5mM polyP、1-3mM ATP或ADP或AMP、1-3mM GTP，反应pH 6.5-9.5，反应温度20-30℃，反应时间2-12h。

9.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，反应体系中含有0.1-0.3mg/mL GDP-L-岩藻糖合成相关酶、0.1-0.3mg/mL岩藻糖基转移酶、0.1-0.3mg/mL ATP和GTP再生酶、1-5mM岩藻糖、1-5mM乳糖、1-5mM polyP、1-3mM ATP或ADP或AMP、1-3mM GTP或GDP或GMP，反应pH 6.5-9.5，反应温度20-30℃，反应时间2-12h。

10.根据权利要求1所述的一种体外多酶级联催化合成岩藻糖基化乳糖的方法，其特征在于，所述岩藻糖基化乳糖包括2’-岩藻糖基化乳糖和3-岩藻糖基化乳糖。