[发明专利]一种基于抗原有色化的食源性致病菌的荧光免疫层析联检方法

说明书

本发明提出一种基于抗原有色化的食源性致病菌的荧光免疫层析联检方法，包括染色剂和试纸条，样品经染色剂有色化培养后通过试纸条进行检测；染色剂为四[4‑(4’‑羧基苯基)苯基]乙烯，试纸条包括样品垫、检测反应区、吸水垫和底板，底板上沿层析方向依次设置样品垫、检测反应区和吸水垫，检测反应区包括至少三条检测线和NC膜，检测线平行且间隔排设在NC膜上。在本申请中,提出的基于抗原有色化的食源性致病菌的荧光免疫层析联检方法，利用染色剂将鲍氏志贺氏菌、沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7进行染色化培养，并通过试纸条进行联合检测。检测线用于捕获被染色剂染色的三种致病菌并显示检测结果，三条检测线既能单独检测，又能同时联合检测上述的三种食源性致病菌，并且对其它食源性致病菌无交叉反应，特异性良好。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，尤其涉及一种基于抗原有色化的食源性致病菌的荧光免疫层析联检方法。

背景技术

食源性疾病是因摄入被污染的食品而引发的疾病，是当今世界上最广泛的卫生问题之一。据报告，食源性疾病的发病率居各类疾病总发病率的第二位。然而，食源性致病菌是导致食源性疾病暴发的主要因素之一，主要存在于牛肉、牛奶、鸡肉、蔬菜、水果及其制品中，被人体摄入后严重感染可导致死亡。因此，对食品中食源性致病菌的及时检测尤为重要。

免疫层析试纸条是一种廉价、便携、适合现场快速检测的技术，可在几分钟内实现准确的检测，广泛用于食品监管、农业生产、环境保护以及临床诊断等领域。免疫层析试纸条大多采用双抗体夹心的模式进行检测，以胶体金等纳米材料实现标记抗体和结果报告双重功能，同时这也导致了试纸条检测性能的优劣严重依赖纳米材料、配对抗体和材料标记抗体的稳定性。然而，性质稳定、分散性良好、粒径均一的标记材料制备要求较高，不易获取，并且可用于双抗体夹心的单克隆抗体获取周期长，对于性能稳定的抗体获取难度则更大，这些因素成为了免疫层析试纸条进一步发展和应用的瓶颈。并且，检测食源性致病菌的免疫层析试纸条大多是单样本的单靶标检测，即一根试纸条只能检测一个样品中的一种致病菌，面对多种待检致病菌，则需分别研发各自对应的试纸条，这无疑增大了建立检测方法的复杂程度。

发明内容

本发明的目的是为了提供一种基于抗原有色化的食源性致病菌的荧光免疫层析联检方法，是为了摆脱免疫层析试纸条对抗体标记材料以及配对抗体的严重依赖，建立无需纳米标记材料和仅需一株特异性抗体就可以实现对食品中多种食源性致病菌(大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌和鲍氏志贺氏菌)的快速联合检测方法。

为了实现上述目的，本发明提出一种基于抗原有色化的食源性致病菌的荧光免疫层析联检方法，包括染色剂和试纸条，样品经所述染色剂有色化培养后通过所述试纸条进行检测；所述染色剂为四[4-(4’-羧基苯基)苯基]乙烯，所述试纸条包括样品垫(1)、检测反应区、吸水垫(4)和底板(7)，所述底板(7)上沿层析方向依次设置所述样品垫(1)、检测反应区和吸水垫(4)，所述检测反应区包括至少三条检测线和NC膜(6)，所述检测线平行且间隔排设在所述NC膜(6)上。

进一步地，所述NC膜(6)上沿层析方向依次设置的所述检测线分别为鲍氏志贺氏菌检测线(2)、沙门氏菌检测线(3)和大肠杆菌O157:H7检测线(4)。

进一步地，所述鲍氏志贺氏菌检测线(2)包括鲍氏志贺氏菌单抗，所述沙门氏菌检测线(3)包括沙门氏菌单抗，所述大肠杆菌O157:H7检测线(4)包括大肠杆菌O157:H7单抗。

进一步地，所述样品垫(1)和吸水垫(4)分别交叠粘贴在所述NC膜(6)两端的上方。

进一步地，所述检测线均通过点样仪以1μL/cm喷涂于所述NC膜(6)上。

进一步地，所述试纸条的宽度为3mm，所述样品垫(1)和吸水垫(4)的长度均为2cm，所述底板(7)的长度为6cm，所述NC膜(6)的长度为2.5cm，相邻所述检测线之间的间距为0.5cm。

进一步地，所述试纸条在4℃避光条件下干燥保存。