[发明专利]一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法

权利要求书

1.一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法，其特征在于，具体步骤如下：

S1：剪切组织，先将所取得的组织，用液清洗以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织；

S2：再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mn3大小，静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次；

S3：消化分离，采用消化酶将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养；

S4：培养，细胞悬液用计数板进行细胞计数，用培养液将细胞数调整为实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜；

S5：将单核细胞重悬于基础培养基中，置于37℃，5％CO2孵箱培养24小时；PBS清洗3次去除未贴壁细胞；剩余贴壁的单核细胞继续培养，每3天换液；

S6：待单核细胞增殖至75％-80％密度时，吸尽基础培养基中的培养基，传代，继续用基础培养基培养；

S7：待单核细胞培养至第五代之后，用抗衰老的干细胞培养基继续培养。

2.根据权利要求1所述的一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法，其特征在于，所述液清洗采用D-Hanks或Hanks液清洗。

3.根据权利要求1所述的一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法，其特征在于，所述消化酶有采用胰蛋白酶或胶原酶。

4.根据权利要求1所述的一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法，其特征在于，所述基础培养基是将胎牛血清100ml、青霉素10ml、链霉素10ml依次加入880mlα-MEM培养基中，混匀后置于4℃保存。

5.根据权利要求1所述的一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法，其特征在于，所述干细胞培养基包括氨基酸、维生素、盐类、脂类、细胞因子和蛋白多肽。

6.根据权利要求5所述的一种可分化再生的延缓机体衰老的干细胞培养方法，其特征在于，所述脂类包括地塞米松、油酸、胆固醇、乙醇胺、亚油酸、硫辛酸和脂质。