[发明专利]M2型巨噬细胞在制备促进移植胰岛细胞存活的制剂或药物中的应用

说明书

本发明涉及生物医学领域，特别涉及M2型巨噬细胞在制备促进移植胰岛细胞存活的制剂或药物中的应用。本发明通过建立小鼠腹腔透析模型，收集腹腔单个核细胞，在体外培养诱导成2型巨噬细胞(M2)，并且将腹腔调节性巨噬细胞输注到同种异基因胰岛移植后的糖尿病小鼠体内，观察M2对移植的胰岛存活和功能发挥的影响，并且通过体外共培养研究M2促进移植物存活的机理。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及M2型巨噬细胞在制备促进移植胰岛细胞存活的制剂或药物中的应用。

背景技术

糖尿病是一种严重影响人类健康的常见慢性疾病。每天外源性胰岛素的注射仍是目前临床治疗糖尿病的主要手段。然而，即使强化的血糖控制也不能完全避免各种并发症的发生，患者还有可能发生低血糖昏迷从而危及生命。胰岛细胞移植能够在体内重建内源性胰岛分泌系统减少并发症的发生，而且与胰腺移植相比具有供体选择范围宽、操作简便、无血管性排斥等优点，因此成为了彻底治疗糖尿病的理想途径。Edmonton方案的提出极大地促进了胰岛移植的临床推广。近期美国北部8中心临床3期实验中，接受胰岛移植一年后有79.2％的患者完全脱离外源胰岛素，然而，不幸地是移植后两年只有41.7％的患者脱离外源胰岛素治疗。如何减少移植后的急性炎症反应和免疫排斥反应从而保持移植物的大量存活是胰岛移植面临的主要障碍。

免疫抑制剂的使用在一定程度上可以显著提高移植胰岛的存活率，但也会抑制机体正常的、有益的免疫反应。长期使用免疫抑制剂可导致机体抵抗力下降，增加机体感染的风险，增加肿瘤发病风险等，而且可能损伤移植的胰岛β细胞。因此，如何在增加移植物存活的同时减少或停止免疫抑制剂的应用是目前临床胰岛移植研究的热点。辅助细胞如间充质干细胞、调节性T细胞、血管内皮祖细胞等能够促进血管系统重建，降低免疫反应，保护胰岛细胞减少胰岛移植物丢失和发生功能障碍，从而提高胰岛移植的结果。研究发现，输注的调节性T细胞不少于人体内的效应细胞的量时才能够诱导机体的免疫耐受。而血管内皮祖细胞由于从外周血分离获得，这些辅助细胞的来源与大量扩增不方便，增加了感染等的风险。因此需要寻找一种来源广泛、获取方便、风险性小、同时具有降低炎症反应和免疫排斥反应的辅助细胞作为免疫治疗的新方法。

巨噬细胞来源于骨髓，它在机体中分布广泛，主要分布于肝、脾、淋巴结、骨髓、胸腺、胸腔、腹腔、血液、皮肤等多种组织器官，是机体免疫系统的重要细胞成分，在抗感染、抗肿瘤、自身免疫性疾病和移植领域中起着非常的重要作用。通过干扰素-γ及细菌脂多糖(LPS)活化的经典巨噬细胞M1，在炎症早期承担着重要作用，起促炎反应。而通过IL-10和TGF-β及免疫复合物等活化的巨噬细胞为非经典激活的巨噬细胞M2，表达抑制炎症因子，起着抑制炎症反应及组织的修复作用。其中M2型巨噬细胞又包括三种亚型，分别为M2a、M2b、M2c。M2a、M2b发挥免疫调节作用及促进Ⅱ型免疫反应，而M2c有抑制免疫反应及组织重构作用。

活化的M2型巨噬细胞分泌大量的IL-10、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、干扰素诱导性蛋白10(IP-10)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)、TGF-β等。其中IL-10是一种重要的抑炎性细胞因子，除了具有调节淋巴细胞、髓样细胞分化的功能，其主要生物学活性是起免疫抑制作用。它能抑制经典激活的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1及IL-12等促炎细胞因子的能力，亦可以抑制Th1细胞的增殖及IL-2、IL-3、IFN-γ、GM-CSF等细胞因子的合成，抑制细胞免疫反应。TGF-β是一个多功能细胞因子，具有调节多种细胞功能的能力。这种细胞因子通过两种途径抑制免疫表达：抑制炎性细胞和促进Tregs的功能。在一期临床实验中，自体巨噬细胞用于治疗脊椎损伤，能够促进神经修复。M2巨噬细胞不仅能够抑制炎症反应和免疫排斥反应，还能够促进胰岛细胞的存活和增殖。

胰岛细胞分离纯化的过程中的机械刺激和应激反应促使其处在炎性介质反应的状态，进而表达大量的炎性细胞因子如MCP-1、TNF-α、INF-γ、IL-6等，移植后，移植物周围的炎性因子和趋化因子水平进一步升高，从而招募炎性细胞浸润导致移植物坏死。

发明内容