[发明专利]一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法，其特征在于：所使用的米粉废水为以米粉生产过程中产生的废弃物，将其作为发酵培养基的主要生产原料，替代培养基中水和部分碳源；所述培养方法包括以下步骤：

(1)菌株固体、液体培养基

枯草芽孢杆菌LB培养基：蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L，

液体培养基：葡萄糖10g/L，蛋白胨15g/L，酵母粉20g/L，谷氨酸钠25g/L，K2HPO4·3H2O2.2g/L，KH2PO41.8g/L，MgSO4·7H2O 0.65g/L,Cacl2 0.37g/L,其余为米粉废水(替代水)，pH＝7.4，定容至1000ml，pH 6.5-8.0；

(2)菌株固体平板培养

从-80℃冰箱中取出枯草芽孢杆菌的甘油管，在超净台中用100ml移液枪吸取100微升菌液，在固体培养基平板上涂布，将枯草芽孢杆菌置于37℃细菌培养箱培养24h，在平板上刮取一环菌群，三区划线划到平板上，将置于37℃培养箱培养24h，取单菌落在平板上进行密集划线；

(3)菌株液体种子液培养

将枯草芽孢杆菌接入含100ml培养基的500ml摇瓶放入37℃培养箱，200rpm，培养24-36h；

所述枯草芽孢杆菌液体发酵的方法，将乳酸菌进行液体菌种按照2％～10％(W/W)接入发酵培养基中，进行发酵，温度30℃～42℃，发酵时间为24h-48h，获得农用液体缓释肥。

2.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法，其特征在于：所用的培养基为：100％的米粉废水、添加部分碳源5～10g/L，氮源12～48g/L，无机盐为2～10g/L，pH6.5～8.0。

3.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法，其特征在于：所述的发酵条件为：采用上述的米粉废水作为发酵培养基的关键组分，液体菌种按照2％～10％(W/W)接入发酵培养基中，进行发酵，温度30℃～42℃，发酵时间为24h-36h，获得农用液体缓释肥。

4.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法，其特征在于：所述液体发酵制备得到的农用液体缓释肥中，总活菌数≥6.7*1011cfu/mL，聚谷氨酸的含量≥35g/L。

5.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法，其特征在于：检测菌剂中活菌数的方法为平板计数法。

6.根据权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌利用米粉废水生产农用液体缓释肥的方法，其特征在于：所述固体培养基为LB培养基加20％琼脂。