[发明专利]一种吗啡免疫荧光层析快检试纸条、制备方法及其检测方法

说明书

本发明涉及一种吗啡免疫荧光层析快检试纸条、制备方法及其检测方法，包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸和胶板。本发明的吗啡荧光免疫快检试纸条采用免疫竞争的原理，吗啡和吗啡抗原共同竞争结合垫上的与荧光微球偶联的吗啡抗体，当裂解液中吗啡含量依次增加时则需要更多的抗体与之结合，故可与T线上抗原结合的抗体的含量则减少，T线的亮度减弱，C线为质检线，亮度不随吗啡含量的增减而变化。本发明的吗啡免疫荧光快检试纸条具有体积小、质量轻、便于携带、分析速度快、操作步骤简单等优点，打破了传统检测方法的局限性。对样本量庞大的现场快速检测提供了有力的技术支持。同时也给公安人员对于现场毒品缉查和检测带来了极大的便利。

技术领域

本发明涉及定量鉴定技术领域，尤其是涉及一种吗啡免疫荧光层析快检试纸条、制备方法及其检测方法。

背景技术

毛发中毒品定性检测是法医毒物鉴定学科中兴起的检测技术，主要对阿片类、苯丙胺类、氯胺酮等毒品进行定性检测。因毛发易于保存、性质稳定、易重复取样、监测时间长等优点，毛发中毒品快速检测已经广泛地应用于毒品司法鉴定、打击毒品犯罪、侦破毒品案件、遏制毒品蔓延等领域。

目前毛发中毒品含量检测的主要方法有；液质联用、质谱法、气质联用等方法该方法虽然可以用于人体毛发中吗啡含量的测定，但由于所使用的仪器设备体积过大，设备维护费用高、检测所需时间长，检测操作步骤繁琐，对于样本量大的的现场快速检测而言，这些方法就难以实现。

发明内容

本发明研究并建立一种毛发中毒品快速检测的分析方法，以解决上述传统方法存在的检测时间长，操作步骤繁琐等局限性。

本发明采用的技术方案为：

一种吗啡免疫荧光层析快检试纸条，包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸和胶板，所述的结合垫的制备方法包括以下步骤：

(1)将结合垫置于结合垫浸泡液中浸泡2小时，取出浸泡好的结合垫置于烘箱中在45下烘干2小时备用；

(2)荧光微球的活化步骤：取荧光微球超声5分钟，取超声好的荧光微球 100微升加1ml 0.05mol/LMES(PH＝5.0)溶液混合均匀，离心13000r/min、20min、弃上清液，再加1ml0.05mol/LMES混合均匀超声5分钟，离心13000r/min、20min，弃上清液，加200微升0.05mol/LMES溶液混合均匀、超声5分钟，用 0.05mol/LMES溶液配制NHS10mg/ml，取15微升加入超声好的荧光微球中，再用纯水配制EDC15mg/ml取2微升加入到上述荧光微球中，用锡箔纸包裹避光摇床反应15分钟；

(3)荧光微球与吗啡抗体偶联物的制备:取100微升每毫克的吗啡抗体20微升加入活化后的荧光微球中混合均匀，避光摇床反应2h，加入10微升0.1mol/L 的乙醇胺溶液混合均匀，避光摇床反应30min后离心13000r/min、10min，弃上清夜，用500微升微球稀释液(0.01mol/LPBS+1％BSA)混合均匀，超声5分钟，避光摇床反应1h，离心13000r/min、10min,弃上清液，用200微升的微球稀释液混合均匀、超声5min.在2～8度下保存；

(4)取出微球吗啡抗体偶联物超声5分钟，取超声好的微球抗体偶联物1微升加入100微升的喷金稀释液配制成喷金混合液，将稀释好的喷金混合液再次超声5分钟让微球抗体偶联物充分的混合均匀，并防止微球抗体偶联物的聚集，取出超声好的喷金混合液，采用XYZ三维喷金划线仪，以1微升每厘米的速度在处理好的结合垫上进行喷金，将喷金后的结合垫置于烘箱中在45度下烘干1 小时备用。

优选地：所的结合垫浸泡液为PH＝7.4的0.05mol/L的Tris-HCL缓冲溶液，其中包含5％的海藻糖、0.5％BSA、0.1％Tween；

优选地：所述的喷金稀释液配方：30mmol/lPBS、0.05％PEG20000、1％BSA、 0.01％SDS、10％蔗糖、3％吐温。