[发明专利]红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法及应用

说明书

本文提供了一种红细胞膜碎片冻干保护液，其包括：10mM‑20mM的葡萄糖、6mM‑12mM的乳糖、121mM‑141mM的海藻糖、29mM‑39mM的NaCl、4.3mM‑5.3mM的KCl、0.115mM‑0.125mM的KH₂PO₄和0.6mM‑1.2mM的Na₂HPO₄。本文还提供了采用该冻干保护液来制备冻干红细胞膜碎片的方法。本文提供的红细胞膜碎片冻干保护液和冻干方法可用于制备冻干红细胞膜碎片，该冻干红细胞膜碎片可用于血型检测，有利于反定型过程的标准化。

技术领域

本发明涉及红细胞膜碎片冻干保护液，以及利用该冻干保护液对红细胞膜碎片进行冻干处理的冻干方法。本发明还涉及该冻干方法制备的冻干细胞膜碎片及其在血型反定型检测方面的应用。

背景技术

目前，临床上进行血型检测主要采用微柱凝胶血型卡，其本质为利用凝集技术检测抗原抗体反应。其中，进行正定型检测是用血型单克隆抗体试剂检测红细胞膜上血型抗原，反定型检测则是用红细胞试剂检测血清中相应抗体。该红细胞试剂采用红细胞保存液来保存红细胞。由于不同单位使用的红细胞保护液的成份及理化性质的差异，会造成反定型用红细胞试剂的质量不稳定，导致血清抗体检测结果不准确，影响到临床输血安全。

一些研究者考虑采用其他在表面带有血型抗原的颗粒物来代替红细胞进行反定型检测。例如，中国专利公开CN101387648A描述了在表面包被血型抗原的磁珠，试图代替红细胞用于血型的反定型检测。然而，已知的是血型抗原为膜蛋白，其在体外难以维持体内环境下所具有的三维结构，会逐渐失去抗原性(与相应血型抗体的反应能力)。因此，这种包被血型抗原的磁珠并不能解决红细胞难以长期保存以及反定型检测难以标准化的问题。

另一些反定型方法利用红细胞膜碎片采用酶联免疫反应进行检测(灵敏度高于凝集技术)，但同样存在血型抗原难以保存的问题。红细胞膜碎片大多为现用现配，少数放在4摄氏度和-20摄氏度短期保存。使用新鲜制备的血型抗原造成工艺复杂，人力过多地消耗于抗原制备中。膜碎片的短期保存方法存在很多缺点，如保存天数不足一周，并且随着保存天数增长，抗原性下降，不适合将红细胞膜碎片作为原料进行大批量生产，造成批间差严重。因而，在血型检测或膜蛋白应用相关领域，一直在探寻适合的原料保存方法。

发明内容

在一方面，本文提供了一种红细胞膜碎片冻干保护液，其包括：10mM-20mM的葡萄糖、6mM-12mM的乳糖、121mM-141mM的海藻糖、29mM-39mM的NaCl、4.3mM-5.3mM的KCl、0.115mM-0.125mM的KH₂PO₄和0.6mM-1.2mM的Na₂HPO₄。

在一些实施方案中，所述红细胞膜碎片冻干保护液包括：20mM的葡萄糖、10mM的乳糖、140mM的海藻糖、39mM的NaCl、5.3mM的KCl、0.125mM的KH₂PO₄和1.2mM的Na₂HPO₄；10mM的葡萄糖、12mM的乳糖、141mM的海藻糖、31mM的NaCl、4.3mM的KCl、0.115mM的KH₂PO₄和1.1mM的Na₂HPO₄；或者15mM的葡萄糖、10mM的乳糖、131mM的海藻糖、35mM的NaCl、5.0mM的KCl、0.115mM的KH₂PO₄和1.1mM的Na₂HPO₄。

另一方面，本文提供了一种冻干红细胞膜碎片的方法，其包括：1) 制备新鲜红细胞膜碎片；以及2) 将所述新鲜红细胞膜碎片与上述红细胞膜碎片冻干保护液混合后进行冻干处理。