[发明专利]一种三联毒品荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法

说明书

本发明公开了一种三联毒品荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法。所述的三联毒品荧光免疫层析试纸条，是由样品垫、NC膜和吸水垫组成；所述的NC膜，从靠近样品垫的一端依次设有MET检测线、MOR检测线、KET检测线和质控线。检测时，将污水待测样品与磁性荧光探针冻干粉孵化反应，回收，加入检测卡点样孔中，层析后将检测卡观察孔用荧光读取仪扫描；通过标准曲线，以及各检测线与质控线电信号的比值计算三种毒品代谢物的浓度。本发明检测样本时先利用磁性荧光探针的磁响应功能捕获并富集待检物质，降低其他物质干扰；然后利用多联检测试纸条定量检测样品中多种待检物质。灵敏度可达ng/L，满足对污水中毒品代谢物的各级溯源要求。

技术领域

本发明属于毒品分析检测领域，具体涉及一种三联毒品(甲基苯丙胺MET、吗啡MOR、氯胺酮KET)荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法。

背景技术

目前，甲基苯丙胺MET、吗啡MOR、氯胺酮KET是滥用最为广泛的三种毒品。

非法药物滥用量的监控一般是通过社会流行病学调查进行，该方法具有很大的局限性和不确定性。

自2001年污水流行病学的概念被提出后，基于污水流行病学的毒情研判技术也逐步被应用到药物滥用的检测中。污水中毒品及其代谢物的主要来源为吸毒人员排泄物、突击缉查时吸毒人员为毁灭证据经下水道冲走的毒品、及制毒场所排放的废水等。通过对城市地下道污水系统中毒品及其代谢物的含量监测能够推算出某种毒品在当地的使用情况。污水中毒品代谢物的监测不仅有助于对吸毒、贩毒分子进行有效抓捕，还能通过逐级定点检测对制毒窝点进行精准溯源定位。

但污水中毒品及其代谢物的含量较低，毒品及其代谢物的种类比较复杂。如何针对污水中最常见的多种毒品作出高效、快速、准确、稳定的检测成为了亟待解决的问题。常规的分析手段很难满足同时对污水中多种微量毒品快速检测的需求，有效的前处理手段和高效、灵敏的分析方法是监测环境中多种滥用药物的关键。

目前甲基苯丙胺、吗啡和氯胺酮等毒品的定量检测和监控方法主要依赖于大型仪器，如高效液相色谱、气相色谱、液质或气质连用等。这些方法灵敏度高、重复性好，但操作复杂，仪器设备昂贵，分析效率低。

酶联免疫吸附测定(ELISA)以及胶体金免疫层析法是目前国际上较为认可的主流检测技术，这两种方法检测速度快，价格便宜，操作简便。但ELISA检测仍需专业人员操作，且结果显示时间长；胶体金免疫层析技术也只能对尿液、血液或唾液等毒品代谢物含量高的样本进行定性分析，存在灵敏度低、批间差异大、分析效率低等问题。

发明内容

本发明提供了一种三联毒品(甲基苯丙胺MET、吗啡MOR、氯胺酮KET)荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法，检测灵敏度可达ng/L(目前多数荧光免疫层析试纸条检毒品的灵敏度在ng/mL范围内)，分析效率高、线性范围好，可以较好地对城市污水中多种毒品代谢物进行现场溯源处理，帮助公安缉毒人员对城市中的毒品产业链进行即时的监测和治理。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

磁性荧光探针的制备方法，包括如下步骤：

(1)标记抗体：将磁性荧光微球活化后，用MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)缓冲液超声重悬，分别加入MET抗体、MOR抗体、KET抗体、羊抗鸡IgY抗体，室温下低速混旋反应至少1h；

(2)封闭：向各抗体标记的磁性荧光微球中分别加入BSA(牛血清白蛋白)，旋转反应至少30min，离心后取沉淀，得到三种检测探针(MET抗体标记磁性荧光探针、MOR抗体标记磁性荧光探针、KET抗体标记磁性荧光探针)和一种质控探针(羊抗鸡IgY抗体标记磁性荧光探针)；

步骤(1)所述的活化，是将磁性荧光微球用MES缓冲液清洗并重悬，再加入EDC(碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)，室温下混旋反应至少30min，离心后取沉淀；