[发明专利]一种三联毒品荧光免疫层析试剂纸、检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.磁性荧光探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)标记抗体：将磁性荧光微球活化后，用MES缓冲液超声重悬，分别加入MET抗体、MOR抗体、KET抗体、羊抗鸡IgY抗体，室温下低速混旋反应至少1h；

(2)封闭：向各抗体标记的磁性荧光微球中分别加入牛血清白蛋白，旋转反应至少30min，离心后取沉淀，分别得到MET抗体标记磁性荧光探针、MOR抗体标记磁性荧光探针、KET抗体标记磁性荧光探针及羊抗鸡IgY抗体标记磁性荧光探针。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的活化，是将磁性荧光微球用MES缓冲液清洗并重悬，再加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，室温下混旋反应至少30min，离心后取沉淀。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

所述的MES缓冲液，浓度0.1M，pH值6.0；

所述的离心是15000rpm离心30min。

4.磁性荧光探针，其特征在于：是由权利要求1-3任一项所述的方法制得。

5.一种磁性荧光探针冻干粉，其特征在于：是将MET抗体标记磁性荧光探针、MOR抗体标记磁性荧光探针、KET抗体标记磁性荧光探针和羊抗鸡IgY抗体标记磁性荧光探针分别以等量的标记保存液重悬，然后将三种检测探针以体积比1:1:1混匀，最后将三种检测探针的混合溶液与羊抗鸡IgY抗体标记磁性荧光探针以9:1的体积比混合，装入冻存管中，进行冷冻干燥，即得磁性荧光探针冻干粉。

6.根据权利要求5所述的磁性荧光探针冻干粉，其特征在于：所述标记保存液的配方如下：在0.1M的Gly-NaOH缓冲液中分别加入质量比为5％蔗糖、5％海藻糖、1％BSA、0.5％酪蛋白钠、0.02％Proclin300。

7.一种三联毒品荧光免疫层析试纸条，其特征在于：是由样品垫、NC膜和吸水垫组成；

所述的NC膜，从靠近样品垫的一端依次设有MET检测线、MOR检测线、KET检测线和质控线。

8.根据权利要求7所述的试纸条，其特征在于：所述各检测线、质控线的间距为3.5mm，KET检测线与吸水垫的距离为11mm。

9.权利要求7或8所述的三联毒品荧光免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将MET-BSA、MOR-BSA、KET-BSA和鸡IgY分别包被于NC膜上，干燥后依次形成MET检测线、MOR检测线、KET检测线和质控线，作为处理后的NC膜；

(2)将玻璃纤维素膜用缓冲液处理，然后干燥，作为样品垫；取吸水纸充分干燥后，作为吸水垫；将样品垫、NC膜和吸水垫依次铺于PVC底板上，经剪切后得到试剂纸。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)的操作采用X、Y、Z三维点膜喷金仪操作，MET-BSA浓度为0.25mg/mL，MOR-BSA浓度为0.5mg/mL，KET-BSA浓度为2mg/mL，鸡IgY浓度为1mg/mL，在NC膜上的包被量为1μL/cm。

11.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述缓冲液的配方是，在0.015M、pH值7.4的PBS缓冲液中分别加入质量比为0.5％S-9表面活性剂、0.1％酪蛋白钠盐和1％蔗糖。

12.一种三联毒品荧光免疫检测卡，其特征在于含有权利要求7或8所述的三联毒品荧光免疫层析试纸条。