[发明专利]一种配合面部线雕的自体胶原蛋白组织填充物

权利要求书

1.一种配合面部线雕的自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，所述自体胶原蛋白组织填充物的原料包括胶原蛋白液、透明质酸凝胶、林格氏液和葡萄糖液；所述胶原蛋白液、透明质酸凝胶、林格氏液和葡萄糖液的体积比为1:2～10:1～2:1～2。

2.根据权利要求1所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，所述胶原蛋白液的制备方法，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织，用D-Hanks缓冲液清洗，去除残留的血液和组织碎片，将自体成纤维组织剪成小块，加入消化液，放入37℃恒温震荡箱中消化20min～60min，然后静置待其分层后，吸取上层成纤维细胞液，移入含有胎牛血清的DMEM培养基中，密封离心分离，去除上清液，再次加入适量含有胎牛血清的DMEM培养基，吹打细胞制成成纤维细胞悬液，接种到培养瓶中，在37℃温度条件下，5％CO₂恒温培养，定期更换培养基直到成纤维细胞铺满培养瓶底部；

步骤二，传代培养，将步骤一得到的成纤维细胞从培养基中取出，加入D-Hanks缓冲液清洗干净，然后加入酶液消化处理，在成纤维细胞长到80％～90％融合后传代培养；

步骤三，胶原蛋白积累，在成纤维细胞生长三代后，将成纤维细胞放入无血清培养基，在37℃无血清培养基中培养，使成纤维细胞分泌出胶原蛋白；

步骤四，成纤维细胞与胶原蛋白的分离，首先将步骤三中的无血清培养基取出，然后用50k超滤膜过滤，再用0.22μm的滤膜过滤，得到胶原蛋白液。

3.根据权利要求2所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，在步骤一中，消化液为胰酶和Ⅰ型胶原酶按照体积比1:1混合而成，其中胰酶的质量分数为0.25％，Ⅰ型胶原酶的质量分数为0.1％。

4.根据权利要求2所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，在步骤一中，离心分离的速度为800rpm～1800rpm，离心时间为5min～15min。

5.根据权利要求2所述的自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，在步骤二中，酶液为质量分数为0.25％的胰酶。

6.根据权利要求1所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，在步骤三中，成纤维细胞在无血清培养基中培养时间为12h～60h。

7.根据权利要求1所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，所述透明质酸凝胶的制备方法，包括：将透明质酸钠溶解于氢氧化钠溶液中，透明质酸钠在溶液中的质量浓度为3％～10％，搅拌至充分溶解，加入交联剂搅拌均匀，交联剂在溶液中的质量浓度为2％～5％，反应温度35℃～50℃，反应时间2h～10h，过滤除去盐酸溶液，加入D-Hanks缓冲液，清洗24h～48h，得到透明质酸凝胶。

8.根据权利要求7所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，所述交联剂为乙二醇二缩水甘油醚、二甘醇二缩水甘油醚、聚乙二醇二缩水甘油醚、聚丙二醇二缩水甘油醚、1，6-己二醇二缩水甘油醚中的任一种。

9.根据权利要求1所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，所述自体胶原蛋白组织填充物中，还加入有细胞生长因子，所述细胞生长因子为表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、角质细胞生长因子、神经生长因子、肝细胞生长因子、转化生长因子-α、血管内皮细胞生长因子中的一种或多种。

10.根据权利要求1或9所述自体胶原蛋白组织填充物，其特征在于，每10ml自体胶原蛋白组织填充物中加入细胞生长因子1mg～5mg。