[发明专利]一种近红外二窗荧光免疫探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种近红外二窗荧光免疫探针，其特征在于，该荧光免疫探针为近红外荧光染料与单域抗体的偶联物；

所述的近红外荧光染料的化学结构式如下：

或，

其中，n₁、n₂、n₃分别独立地选自1、2或3；

R₁、R₂、R₃分别独立地选自氢原子、未取代的烷基、苯基、苯基取代的烷基或烷磺酸基；

R₄选自氢原子、未取代的烷基、苯基、苯基取代的烷基、卤素或烷磺酸基；

X₁、X₂分别独立地选自S、O、未取代的烷基、苯基取代的烷基或烷磺酸基；

所述的单域抗体为抗5T4抗体或抗SARS-CoV-2抗体；

所述的抗5T4抗体、抗SARS-CoV-2抗体的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的一种近红外二窗荧光免疫探针，其特征在于，所述的偶联为共价偶联。

3.一种如权利要求1或2所述的近红外二窗荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）将单域抗体与还原剂混合，之后振荡反应，再加入溶解在有机溶剂中的近红外荧光染料，得到混合物；

2）将步骤1）中的混合物加入至脱盐柱，除去残余的近红外荧光染料，之后离心收集上清液，即得到所述的近红外二窗荧光免疫探针。

4.根据权利要求3所述的一种近红外二窗荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤1）中，所述的还原剂为磷酸三(2-氯乙基)酯、二乙基三胺五乙酸或5,5’-二硫代双(2-硝基苯甲酸)，所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或二甲基亚砜。

5.根据权利要求4所述的一种近红外二窗荧光免疫探针的制备方法，其特征在于，步骤1）中，振荡反应过程中，反应温度为4-60℃，反应时间为50-70min；步骤2）中，离心过程中，离心温度为3-5℃，离心时间为0.5-1.5min，离心转速为7000-9000r/min。

6.一种如权利要求1或2所述的近红外二窗荧光免疫探针在制备荧光活体成像检测溶液中的应用。