[发明专利]一种高效提取蝉花虫草子实体中N6-(2-羟乙基)腺苷的方法

说明书

本发明属于食用菌活性成分提取技术领域，具体涉及一种高效提取蝉花虫草子实体中N6‑(2‑羟乙基)腺苷的方法。本发明所述高效提取蝉花虫草子实体中N6‑(2‑羟乙基)腺苷的方法，在现有技术传统的乙醇提取‑树脂分离‑制备型色谱分离的提取方法的基础上，通过在乙醇提取步骤中加入肌氨酸的方式进行辅助提取，有助于提高N6‑(2‑羟乙基)腺苷的提取效率。

技术领域

本发明属于食用菌活性成分提取技术领域，具体涉及一种高效提取蝉花虫草子实体中N6-(2-羟乙基)腺苷的方法。

背景技术

N6-(2-羟乙基)腺苷(N6-(2-hydroxyethyl)adenosine，HEA)是从蝉花虫草菌丝体中提取的腺苷类衍生物，是虫草的特有成分，已报道的功能包括杀菌、抗癌和抗惊厥等，并具有Ca²⁺拮抗作用和肌肉收缩活性。HEA是目前已知的第一个生物来源的钙离子拮抗剂，也是腺苷A1受体激动剂，使用DPCPX(腺苷A1受体拮抗剂)可以证明HEA是作用于腺苷A1受体，而虫草独特的药用价值更促使其药理学研究不断发展。目前，HEA的含量是衡量虫草品质的重要指标，但是，无论是天然虫草还是人工虫草，其HEA的含量均十分低，为HEA的提取造成了一定的困难，普遍存在着提取效率较低的问题。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种高效提取蝉花虫草子实体中N6-(2-羟乙基)腺苷的方法，以解决现有技术中HEA提取率较低的问题。

为解决上述技术问题，本发明所述的一种高效提取蝉花虫草子实体中N6-(2-羟乙基)腺苷的方法，包括如下步骤：

(1)取蝉花虫草子实体进行粉碎，加入乙醇溶液混匀，并加入肌氨酸进行辅助提取；

(2)收集提取液以树脂进行分离，并以低浓度乙醇溶液进行洗脱，收集洗脱液，经浓缩干燥，备用；

(3)将所得浓缩物用低浓度甲醇溶液溶解，注入反相高效液相制备色谱进行分离，收集制备图谱中14.6-15.2min的色谱峰组分，干燥，即得。

具体的，所述步骤(1)中，所述肌氨酸的加入量占所述蝉花虫草子实体用量的3-8wt％。

具体的，所述步骤(1)中，所述乙醇溶液的浓度为30-50v/v％。

具体的，所述步骤(1)中，所述乙醇溶液的用量为所述蝉花虫草子实体用量的2-4倍量。

具体的，所述步骤(2)中，所述树脂为D101大孔树脂。

具体的，所述步骤(2)中，控制所述子实体与所述树脂的用量比为1：8-12g/mL。

具体的，所述步骤(2)中，所述洗脱液为体积浓度15-25v/v％的乙醇溶液，使用量为3-5倍柱体积。

具体的，所述步骤(3)中，所述低浓度甲醇为体积分数10-20v/v％的甲醇溶液，并配置样品浓度为50-150mg/ml。

具体的，所述步骤(3)中，所述反相高效液相制备色谱条件包括：

色谱柱：C18键合相填料柱；

流动相：10-20v/v％甲醇-水溶液；

检测波长：紫外检测器260nm；

流动相流速：160ml/min；

进样量：10ml。

具体的，所述蝉花虫草子实体为N6-(2-羟乙基)腺苷高含量子实体。

本发明所述的N6-(2-羟乙基)腺苷高含量蝉花虫草子实体经由可提高蝉花虫草子实体中N6-(2-羟乙基)腺苷含量的方法栽培获得，具体包括在液体培养基中进行液体菌种培养以及在固体培养基中进行子实体培养的步骤；