[发明专利]桃核承气汤物质基准的建立方法

权利要求书

1.一种桃核承气汤制剂物质基准的建立方法，其特征在于，所述桃核承气汤制剂由以下组分组成：桃仁、大黄、肉桂、甘草和芒硝；所述建立方法包括：

（1）采用薄层色谱法对桃仁、大黄、肉桂、甘草进行鉴别，采用理化鉴别法对芒硝进行鉴别；

（2）构建特征图谱对桃核承气汤制剂中的成分进行鉴别；

（3）采用高效液相色谱法对桃核承气汤制剂中的D-苦杏仁苷含量、总蒽醌含量、游离蒽醌含量、肉桂酸含量、桂皮醛含量、甘草酸含量进行测定，并计算结合蒽醌含量；其中，结合蒽醌含量=总蒽醌含量-游离蒽醌含量；

其中，所述桃核承气汤制剂特征图谱的构建方法为：

（i）分别取没食子酸对照品、儿茶素对照品、苦杏仁苷对照品、表儿茶素没食子酸酯对照品、甘草苷对照品、芹糖甘草苷对照品、桂皮醛对照品、肉桂酸对照品、大黄酚-1-O-葡萄糖苷对照品、大黄酚-8-O-葡萄糖苷对照品、大黄素-8-O-葡萄糖苷对照品、大黄酸对照品、甘草酸对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品适量，加入溶剂溶解或提取，制得特征图谱对照品溶液；

（ii）取桃核承气汤制剂，加提取溶剂提取，制得特征图谱供试品溶液；所述提取溶剂为20~70%甲醇；

（iii）取预设量的特征图谱对照品溶液和特征图谱供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以Waters CORTECS T3柱为色谱柱，其柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm；以甲醇为流动相A，0.15%~0.25%磷酸水溶液为流动相B进行梯度洗脱，构建桃核承气汤制剂的特征图谱；

步骤（iii）中，所述梯度洗脱按下述程序进行：

0~5min，流动相A从1%→8%，流动相B从99%→92%；

5~21min，流动相A从8%→23%，流动相B从92%→77%；

21~35min，流动相A从23%→31%，流动相B从77%→69%；

35~45min，流动相A从31%→55%，流动相B从69%→45%；

45~51min，流动相A从55%→65%，流动相B从45%→35%；

51~56min，流动相A从65%→83%，流动相B从35%→17%；

56~65min，流动相A从83%→100%，流动相B从17%→0%；

其中，检测时间为0~30分钟时，检测波长为220nm；检测时间为30~45分钟时，检测波长为290nm，检测时间为45~65分钟时，检测波长为260nm。

2.如权利要求1所述的桃核承气汤制剂物质基准的建立方法，其特征在于，所述桃仁的薄层色谱鉴别方法为：

（1）取桃核承气汤制剂，加乙醚提取后，用三氯甲烷溶解，即得桃仁薄层供试品溶液；

（2）取桃仁对照药材，加乙醚提取后，用三氯甲烷溶解，即得桃仁薄层对照药材溶液；

（3）分别吸取桃仁薄层供试品溶液、桃仁薄层对照药材溶液，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚和乙酸乙酯的混合溶液为展开剂，展开后喷以硫酸乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.如权利要求2所述的桃核承气汤制剂物质基准的建立方法，其特征在于，所述桃仁的薄层色谱鉴别方法为：

（1）取桃核承气汤制剂0.2~1g，加30~50mL乙醚，加热回流提取1~2h，滤过，滤液挥干，残渣加三氯甲烷0.5~2mL溶解，即得桃仁薄层供试品溶液；

（2）取桃仁对照药材1~2g，加水100~200mL，加热煮沸30~60分钟，滤过，滤液浓缩至15~30mL，用乙醚振摇提取1~3次，每次15~30mL，合并乙醚液，挥干，残渣加三氯甲烷0.5~2mL使溶解，即得桃仁薄层对照药材溶液；

（3）分别吸取桃仁薄层供试品溶液、桃仁薄层对照药材溶液各5~10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8.5：1的石油醚、乙酸乙酯混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100~110℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。