[发明专利]一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法

说明书

本发明公开了医学检验技术领域的一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法，包括标记物预包被的样本杯和一个反应试剂条，所述反应试剂条包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、包被膜和吸水纸，所述样本杯上包被标记有标记指示物的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和兔IgG。本发明的免疫层析试剂盒，将免疫层析技术引入中和抗体的定性检测中，若标记物为荧光微球，必须搭配荧光检测仪使用，若标记物为带颜色的乳胶微球或胶体金则肉眼即可观察结果，实现了新冠病毒中和抗体的单人份快速定性检测，且灵敏度高，批内、批间差小，为临床使用提供了极大便利。

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，具体是一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法。

背景技术

新型冠状病毒肺炎是一种由SARS-CoV-2感染引起的呼吸道疾病。普遍的症状是发烧、咳嗽、气短或呼吸困难，一些比较严重的情况，感染后会导致肺炎、严重的呼吸道综合症(SARS)、肾衰竭和死亡。

2020年下半年开始陆续有不少新型冠状病毒疫苗通过临床试验，上市发布，为了更好地监测感染率、群体免疫和保护性免疫，以及评价临床试验期间和大规模接种后的疫苗效力，亟须一种能检测新冠病毒中和抗体的快速试验。而目前，检测中和抗体的黄金试验标准，要求在生物安全三级防护实验室里处理新冠活病毒，而且非常耗时，通常要2天到4天才能完成。基于假病毒的病毒中和试验，被认为是另一种检测中和抗体的方法，其可以在生物安全二级实验室操作，但仍需使用活病毒和细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法，设计了一种替代病毒中和试验，无需使用任何活病毒或细胞，只需30分钟内就能完成人血清、血浆或全血中新型冠状病毒中和抗体的检测，且可以在生物安全二级实验室进行，比普通酶联免疫检测方法快速且不需要特殊的设备，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种定性检测新型冠状病毒中和抗体的试剂盒及制备方法，包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、包被膜和吸水纸，另外加上一个样品反应杯、所述样品反应杯杯上包被标记有标记指示物的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和兔IgG抗体，所述包被膜包括平行设置且相互间隔的检测区和对照区，所述检测区包被有重组新冠病毒受体 ACE2蛋白，所述对照区包被有羊抗兔IgG抗体；所述包被膜为硝酸纤维膜。

一种上述的定性检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)在包被膜上分别固定重组新型冠状病毒ACE2受体蛋白和羊抗兔IgG抗体，形成检测区和对照区；

(2)先制备标记有标记指示物的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或RBD片段，然后烘干或冻干固定在样本杯上；

(3)在底衬上依次设置样品垫、包被膜和吸水纸，获得所述定性检测新型冠状病毒中和抗体的免疫层析试剂盒。

进一步的，所述步骤(1)和(2)中标记有标记荧光微球、有颜色乳胶微球的重组新冠病毒刺突蛋白(S蛋白)或其片段RBD蛋白和羊抗兔IgG抗体的制备方法包括如下步骤：

(1)使用0.01-0.05mol/L的pH6.0的MES活化缓冲液洗涤微球，加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，使微球终浓度为0.2g/L，室温反应15-30分钟，然后充分洗涤微球，用0.02-0.05mol/LpH7.4-7.6的硼酸盐缓冲液复溶；

(2)按标记蛋白与微球的质量比为1:5-15的比例，在复溶后的微球中加入待标记蛋白，室温反应2小时，加入含有5％BSA的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液，室温反应30 分钟，10000-15000rpm离心后洗涤，再用含有0.5％BSA，0.05％Tween-20的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸缓冲液复溶至原体积；