[发明专利]一种基于表面吸附的可注射海绵状聚酯微球外泌体缓释系统及其制备方法

权利要求书

1.一种基于表面吸附的可注射海绵状聚酯微球外泌体缓释系统，其特征在于：包括海绵状聚酯微球、吸附涂层和外泌体，所述海绵状聚酯微球作为可注射基体，吸附涂层作为外泌体吸附锚点；

所述外泌体来源为人脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、牙髓间充质干细胞、脱落乳牙牙髓干细胞中的一种或多种；

所述外泌体能在一个月内持续释放，外泌体释放行为受吸附涂层调控；

所述海绵状聚酯微球为：可注射海绵状聚乳酸微球，可注射海绵状丙交酯-乙交酯共聚物微球，可注射海绵状聚己内酯微球；

所述吸附涂层为磷酸钙涂层；所述磷酸钙涂层是通过生物矿化的方法沉积到可注射海绵状聚酯微球表面上；配制1倍-10倍浓度的标准ISO 23317-2007模拟体液，将海绵状聚酯微球悬浮于其中，在37℃反应3h-7天后，去离子水洗涤3次，冷冻干燥得到磷酸钙涂层的海绵状聚酯微球。

2.根据权利要求1所述的一种基于表面吸附的可注射海绵状聚酯微球外泌体缓释系统的制备方法，其特征在于有以下步骤：

(1)制备可注射海绵状聚酯微球；

(2)对步骤(1)中所得可注射海绵状聚酯微球进行吸附涂层修饰；

(3)分离细胞外泌体，将外泌体分散于缓冲液中，取步骤(2)中所得吸附涂层修饰后的可注射海绵状聚酯微球，置于含外泌体的缓冲液中，在避光、4摄氏度的摇床中20-100rpm孵育1-24小时；

(4)通过吸附涂层已经将外泌体吸附在可注射海绵状聚酯微球的表面，形成了可注射海绵状聚酯微球外泌体缓释体；

其中，磷酸钙涂层修饰可注射海绵状聚酯微球的制备：

1)配制1.5倍模拟体液：具体操作为：向恒温37℃的1000ml去离子水中，依次加入NaCl11.994g，NaHCO3 0.525g，KCl 0.336g，K2HPO4·3H2O 0.342g，MgCl2·6H2O 0.458g，Na2SO4 0.107g和Tris 9.086g，用1mol/L盐酸调节溶液pH至6.5后加入CaCl2 0.417g，最后再用少量Tris将溶液pH调至7.0；

2)向步骤1)中1.5倍模拟体液中分别加入可注射海绵状聚乳酸微球PLA-PMS，可注射海绵状丙交酯-乙交酯共聚物微球PLGA-PMS，可注射海绵状聚己内酯微球PCL-PMS，在恒温37℃，机械搅拌100rpm的条件下避光反应24h；

3)停止搅拌，在4000rpm下离心10分钟收集磷酸钙涂层修饰的微球，水洗三遍，冷冻干燥24小时，分别得到磷酸钙涂层修饰的可注射海绵状聚酯微球，记为：PLA-PMS-Ca，PLGA-PMS-Ca，PCL-PMS-Ca。

3.根据权利要求2所述的一种基于表面吸附的可注射海绵状聚酯微球外泌体缓释系统的制备方法，其特征在于：所述可注射海绵状聚酯微球的制备步骤为：

(1)溶液配制：将聚乙烯醇，表面活性剂Tween 60和去离子水混合配制得到外水相W；将表面活性剂Span80、生物可降解脂肪族聚酯溶于二氯甲烷中得到油相O；

(2)乳液形成：将致孔剂加入油相O中，2000-20000rpm均质5分钟，形成初乳液E；将初乳液E加入外水相W中，得到E/W复乳液；

(3)形成多孔结构：将所得E/W复乳液300rpm机械搅拌1-4小时，去除致孔剂，形成多孔聚酯微球；

(4)表面刻蚀：将步骤(3)中多孔聚酯微球加入碱溶液中，100rpm搅拌1-30分钟，形成海绵状聚酯微球；

(5)收集冻干：停止搅拌，在4000rpm下离心10分钟收集海绵状聚酯微球，经去离子水洗涤5次后，冷冻干燥24-48小时；

所述步骤(1)中用到的生物可降解脂肪族聚酯，是聚乳酸、丙交酯-乙交酯共聚物、聚己内酯中的一种。

4.根据权利要求3所述的一种基于表面吸附的可注射海绵状聚酯微球外泌体缓释系统的制备方法，其特征在于：生物可降解脂肪族聚酯溶液浓度为2.5-20wt％，每毫升聚合物溶液添加0.5-5毫克Span 80，每毫升去离子水中添加2-20毫克聚乙烯醇和0.5-5毫克Tween60。