[发明专利]肝癌原代细胞的培养基及培养方法

说明书

本发明提供了一种实现肝癌原代细胞体外快速扩增的培养基和培养方法。本发明的肝癌原代细胞培养基包含初始培养基、GlutaMAX、非必需氨基酸、地塞米松、ITS细胞培养添加剂、Rho蛋白酶抑制剂、胰岛素、抗生素、神经调节蛋白1、肝细胞生长因子、A8301、胎牛血清、以及选自B27添加剂和N2添加剂中的至少一种的添加剂。通过使用本发明的肝癌原代细胞培养基，能够实现肝癌原代细胞的有效快速扩增，这样扩增得到的细胞保持了病人的病理特性，提高了肝癌原代细胞的培养成功率和细胞扩增速率，可以为患者的个性化治疗提供研究基础。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于肝癌原代细胞的快速扩增的培养基及培养方法，及其在药物的疗效评估和筛选中的应用。

背景技术

原代培养(primary culture)也叫初代培养，指直接从体内取出的肿瘤细胞或组织进行的第一次培养。最常用的原代培养包括组织块培养和分散细胞培养。组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。如欲从临床活检或切除的肿瘤组织分离到活性最好的游离细胞，经典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和胶原酶)消化细胞间的结合物，或用金属离子螯合剂(如EDTA)除去细胞互相粘着所依赖的Ca²⁺，再经机械轻度振荡，使之成为单细胞。

近几年来，肝癌术后辅助化疗作为一种新型辅助治疗方式已逐渐得到临床医生的重视与认可，包括术后TACE治疗，口服药物治疗等，但由于缺乏规范化疗方案，常规凭经验化疗，忽略个体差异，带有一定的盲目性，因此效果一直不佳，单药及联合用药的有效率低于20％(Jindal A,Thadi A,Shailubhai K.Hepatocellular Carcinoma:Etiology andCurrent and Future Drugs[J].J Clin Exp Hepatol,2019,9(2):221-232)。新兴的靶向药物虽然在一定程度上降低了毒副作用，但是数量太少，治疗费用昂贵，且有效率随个体差异，难以满足大多数患者的治疗需求。由于缺乏有效的肝癌药敏试验体系，无法做到精准化疗，因此将肝癌体外药敏结果与临床体内反应相对应就成为治疗关键。

高通量药敏实验技术(High-throuphput Drug Sensitivity)是一种新型药敏检测方法，具有检测药物覆盖率广，有效率高，个体化强等优点，已在白血病领域取得显著进展。对比其他类型药敏实验模型(PDO、PDX)同时也具有经济、快速、易于推广等优点。而目前这一技术在肝癌领域所遇到的瓶颈主要是缺乏有效的、快速的、稳定的原代肝癌细胞培养扩增技术。

现已发现，使用滋养层细胞的条件性重编程培养法(conditional reprogrammingculture，CRC)可以快速稳定建立原代肿瘤细胞系(Xuefeng Liu,Ewa Krawczyk,etal.Conditional reprogramming and long-term expansion of normal and tumorcells from human biospecimens.Nature Protocols,VOl.12,NO.2,2017,439-451)。然而使用该文献中记载的条件培养基(F Meduim)培养经过体外筛选的稳定细胞株，其培养周期较长，不能满足临床快速检测的需求。因此，需要开发一种适用于原代肝癌细胞的快速稳定的培养基及培养方法，使得能够在两周以内进行高通量药物筛选，有效指导临床合理用药。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于在体外快速扩增肝癌原代细胞的培养基及培养方法。