[发明专利]抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的方法

说明书

本发明公开了一种抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的方法，该方法采用氨基核苷类抗生素和肽转移酶抑制剂嘌呤霉素，通过将雌激素受体阳性乳腺癌细胞MCF‑7采用抗体标记后，进行流式细胞分选得到乳腺癌干细胞，利用不同剂量嘌呤霉素和不同时间处理，达到抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的目的。因此，该方法增加了嘌呤霉素在乳腺癌研究和治疗领域的应用，同时增加了嘌呤霉素在抗癌药物筛选上的应用。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，根据免疫组织化学分析雌激素受体的状态主要分为：雌激素阳性乳腺癌和雌激素受体阴性乳腺癌。在乳腺癌中，有一小部分细胞亚群保留了自我更新和分化的能力来填充整个肿瘤，可能是促进肿瘤发生和发展的元凶，被称为乳腺癌干细胞。乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的指标包括干细胞集落形成能力、干细胞3D形成率、干细胞数、干细胞的细胞周期变化、干细胞的划痕迁移水平和增殖相关蛋白表达水平变化。嘌呤霉素是一种氨基核苷类抗生素，作为肽转移酶的抑制剂，能够通过提前终止多肽链的合成，阻止蛋白质的合成。已有研究发现嘌呤霉素对乳腺癌细胞的生长具有抑制作用，同时，还可以能够抑制结肠癌干细胞的增殖并促进肿瘤细胞的凋亡。

发明内容

本发明的目的是提供一种抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的方法，该方法利用氨基核苷类抗生素嘌呤霉素，以干细胞为靶点，采用体外培养技术和组织化学方法用于抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力。

本发明所采用的技术方案是，抑制雌激素受体阳性乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的方法，包括如下步骤：

步骤1，建立检测乳腺癌干细胞增殖和迁移能力的体系；

步骤2，基于步骤1建立的体系，针对雌激素受体阳性乳腺癌干细胞，采用不同浓度的嘌呤霉素，抑制癌干细胞的增殖和迁移能力。

步骤1的具体过程为：

步骤1.1，将人乳腺癌细胞系MCF-7使用RPMI-1640培养基，添加10％胎牛血清、1％青霉素/链霉素，培养在37℃二氧化碳培养箱中，生长至对数生长期时用于实验；

步骤1.2，取步骤1.1所得的对数生长期的细胞胰酶分别进行消化、重悬后加入干细胞标志物ABCG2抗体，冰上避光孵育15min，清洗后离心弃去上清，定容后进行流式分选；

步骤1.3，将步骤1.2分选得到的乳腺癌干细胞铺板在吸附的96孔板中，以0～0.5μM浓度的嘌呤霉素处理24～72小时，待5～7天后镜下计数，测量直径，统计乳腺癌干细胞富集的乳腺微球的形成率。

乳腺癌干细胞以500个细胞/孔铺板在吸附的96孔板中，以0.5μM浓度的嘌呤霉素处理48小时，待5天后镜下计数。

步骤2的具体过程为：

步骤2.1，集落形成检测：将细胞接种在6孔板中，加药培养2周后弃去培养液，冰甲醇固定细胞后进行结晶紫染色，显微镜下计数集落；

步骤2.2，3D类器官直径测量：将乳腺微球接种至含有基底膜基质的离心管中混匀，铺板于超低吸附的12孔板中培养2天后加药处理，培养6天后测量形成的3D类器官直径；

步骤2.3，流式细胞术检测细胞周期：收集药物处理后的细胞，加入预冷70％乙醇4℃固定24小时，重悬后加入碘化丙啶染色液，室温避光后流式上样；

步骤2.4，划痕实验检测细胞迁移：将细胞接在6孔板中生长至约95％时，用枪头划痕，去除培养液后，加入药物后立即拍照，24小时后再次在相同位置拍照；