[发明专利]抗Calponin蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可以识别人Calponin抗原的单克隆抗体，分泌细胞株、其制备方法以及其在免疫检测中的用途。上述技术方案选取Calponin蛋白C末端的第1位至第297位氨基酸为抗原肽，进行密码子优化，成为适合在大肠杆菌BL21表达的基因片段，最后得到的重组蛋白包含Calponin蛋白片段及组氨酸蛋白标签。所述重组蛋白对小鼠进行免疫，经细胞融合、筛选和亚克隆，获得高效分泌抗Calponin蛋白单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株24H5,以及由该细胞株所分泌的抗Calponin蛋白单克隆抗体。本方案得到的抗体具有高特异性、敏感性，可以特异性识别表达Calponin蛋白的细胞，适用于免疫学检测，特别是免疫组化检测。

技术领域

本发明涉及生物医学工程领域，特别涉及一种抗Calponin蛋白单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用。

背景技术

Calponin(CaP)，首次于1986年由Takahashi等在鸡胃平滑肌中发现，分子量约为34-kDa(292-330个氨基酸)的蛋白质，结合在细肌丝上，作为一种肌动蛋白结合蛋白参与平滑肌的收缩。其分子结构主要由氨基末端的单一CH结构域(calponin homology domain)和羧基末端calponin样重复模体(calponin-like repeat,CLR)的单拷贝或多拷贝的串联重复序列组成。CaP是分化标志蛋白,在分化型平滑肌细胞中大量表达,它通过与细胞骨架蛋白肌动蛋白相结合,参与肌动蛋白细胞骨架重构,具有多种生物学功能,其表达改变与许多疾病的发生发展密切相关。

Calponin既表达于平滑肌细胞，也表达于肌纤维母细胞及肌上皮细胞，常被用于检测乳腺、涎腺及前列腺等增生性病变中肌上皮细胞的完整性。肿瘤细胞常呈现Calponin阳性，而恶性肿瘤多出现Calponin降低。残余Calponin的水平与疾病预后成正相关。转移性前列腺癌细胞系PC3-M和其亲本细胞PC3相比较，PC3-M中Calponin 2表达显著减少，且PC3-M的增殖和迁移速度变快，而给PC3-M转染增加Calponin 2表达水平则会纠正这种表型。同样，在人纤维肉瘤、平滑肌肉瘤、滑膜肉瘤和骨肉瘤细胞中转染增加Calponin 1表达水平后，会显著降低锚定非依赖性的细胞增殖和体内肿瘤发生，表明Calponin有肿瘤抑制因子的功能。这可能与Calponin表达水平降低造成肿瘤细胞肌动蛋白细胞骨架的稳定性降低，运动增强有关。因此，Calponin可作为肿瘤良、恶性鉴别的主要手段之一。

发明内容

发明人提供了一种抗Calponin单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID4所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID5所示的氨基酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的DNA序列为SEQ ID2所示的核苷酸序列，所述单克隆抗体的轻链可变区的DNA序列为SEQ ID3所示的核苷酸序列。

进一步地，所述单克隆抗体特异性识别Calponin蛋白。

进一步地，所述单克隆抗体为小鼠IgG_2b亚型单克隆抗体。

进一步地，由保藏号为CGMCC NO 20775的杂交瘤细胞株产生。

发明人又提供了一种抗Calponin蛋白单克隆抗体的制备方法，其用于免疫小鼠的抗原为重组蛋白，所述重组蛋白由大肠杆菌重组表达，包含Calponin蛋白片段及组氨酸蛋白标签；所述Calponin蛋白片段为Calponin蛋白的第1位至第297位氨基酸片段，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

发明人还提供了一株分泌抗Calponin蛋白分子的杂交瘤细胞株，所述细胞株为小鼠杂交瘤细胞株24H5，所述细胞株已于2020年9月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO 20775，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。