[发明专利]经过反密码子编辑的tRNA作为分子开关在精准控制蛋白表达及病毒复制中的应用在审
| 申请号： | 202110516652.0 | 申请日： | 2021-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN113308463A | 公开（公告）日： | 2021-08-27 |
| 发明（设计）人： | 汤艳东;蔡雪辉 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/85;C12P21/00;C12N7/00 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 马鑫 |
| 地址： | 150009 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 经过 密码子 编辑 trna 作为 分子 开关 精准 控制 蛋白 表达 病毒 复制 中的 应用 | ||
1.经过反密码子编辑的tRNA作为分子开关在精准控制蛋白表达或病毒复制中的应用，其中，所述的蛋白的编码基因中一个或多个正常氨基酸编码基因被提前终止密码子所替换；所述的病毒为复制缺陷型病毒，该病毒基因组中的必须基因中的一个或多个正常氨基酸编码基因被提前终止密码子所替换，自身无法进行复制；所述的经过反密码子编辑的tRNA携带正常氨基酸，同时能够识别所述的提前终止密码子，并将携带的氨基酸插入到相应的位置，从而使得所述的蛋白以及复制缺陷型病毒在经过反密码子编辑的tRNA存在下完成表达及复制。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的蛋白或复制缺陷型病毒基因组中的必须基因中的两个以上正常氨基酸编码基因被提前终止密码子所替换。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的经过反密码子编辑的tRNA选自以下tRNA中的一种或者二者的组合：
(1)ArgUGA tRNA，该tRNA携带精氨酸，同时能够识别提前终止密码子UGA，并将携带的精氨酸插入到相应的位置，其是由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列转录后得到；
(2)GlyUGAtRNA，该tRNA携带甘氨酸，同时能够识别提前终止密码子UGA，并将携带的甘氨酸插入到相应的位置，其是由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列转录后得到。
4.一种经过反密码子编辑的tRNA，其特征在于，所述的经过反密码子编辑的tRNA选自以下tRNA中的一种或者二者的组合：
(1)ArgUGA tRNA，该tRNA携带精氨酸，同时能够识别提前终止密码子UGA，并将携带的精氨酸插入到相应的位置，其是由SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列转录后得到；
(2)GlyUGAtRNA，该tRNA携带甘氨酸，同时能够识别提前终止密码子UGA，并将携带的甘氨酸插入到相应的位置，其是由SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列转录后得到。
5.一种表达载体，其特征在于，所述的载体中含有1至多个拷贝的权利要求4所述的经过反密码子编辑的tRNA。
6.一种应用于蛋白表达精准调控或复制缺陷型病毒复制的细胞系，其特征在于，所述的细胞系中含有并稳定表达1至多个拷贝的权利要求4所述的经过反密码子编辑的tRNA。
7.如权利要求6所述的细胞系，其特征在于，所述的细胞系还含有EGFP基因，所述的EGFP基因中的一个或多个正常氨基酸编码基因被提前终止密码子所替换。
8.如权利要求7所述的细胞系，其特征在于，ArgUGAtRNA存在的情况下，所述的EGFP基因中第74、110、123或169位精氨酸编码基因中的至少一个被提前终止密码子所替换，GlyUGAtRNA存在的情况下，所述的EGFP基因中第25、34、92或128位甘氨酸编码基因中的至少一个被提前终止密码子所替换。
9.权利要求5所述的表达载体在精准控制蛋白表达或病毒复制中的应用。
10.权利要求6-9任一项所述的细胞系在在精准控制蛋白表达或病毒复制中的应用。
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