[发明专利]一种高产环孢菌素的植物内生镰刀菌及其应用有效
申请号: | 202110514713.X | 申请日: | 2021-05-12 |
公开(公告)号: | CN113151013B | 公开(公告)日: | 2022-06-21 |
发明(设计)人: | 徐良雄;李丰名;杨鑫娜;吕镇城;彭永宏;钟志娟 | 申请(专利权)人: | 惠州学院 |
主分类号: | C12N1/14 | 分类号: | C12N1/14;C12P21/04;C07K7/64;C07K1/20;C07K1/16;C12R1/77 |
代理公司: | 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 | 代理人: | 郭大为 |
地址: | 516000 *** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 高产 菌素 植物 镰刀 及其 应用 | ||
1.一种高产环孢菌素的植物内生镰刀菌的发酵方法,其特征在于,包括以下步骤:
将镰刀菌(
将活化好的镰刀菌(
将一级种子液接种至PDB培养基中培养1~3天得到二级种子液,然后将二级种子液接种至固体培养基进行固体发酵培养,得到固体发酵物,其中,固体发酵的培养温度为20~30℃;
所述固体培养基的组分设置为以下情况:
所述固体培养基包括:组分A和蒸馏水,所述组分A与蒸馏水的料液比为1:1~5,所述组分A为玉米、大米、小麦、麦麸和椰子油饼中的任意一种;
或,所述固体培养基包括:组分B、组分C和蒸馏水,所述组分B、所述组分C和蒸馏水的料液比为1:1:1~5,当所述组分B为玉米时,所述组分C为小麦、麦麸和椰子油饼中的任意一种,当所述组分B为麦麸时,所述组分C为椰子油饼;
或,所述固体培养基包括:玉米、蒸馏水和组分D,所述组分D为甘油、麦芽提取物、大豆蛋白胨、酵母提取物和酪蛋白胨中的任意一种,所述玉米、所述蒸馏水和所述组分D之间的料液比为1:1:0.01~0.05;
其中,所述高产环孢菌素的植物内生镰刀菌为镰刀菌(
2.一种高产环孢菌素的植物内生镰刀菌制备环孢菌素A的方法,其特征在于,包括以下步骤:
使用权利要求1所述的高产环孢菌素的植物内生镰刀菌的发酵方法进行发酵培养,得到发酵培养物;
将发酵培养物用浸提液进行浸提,过滤后浓缩得到浸膏,其中,所述浸提液为95%乙醇或乙酸乙酯;
将浸膏进行硅胶柱层析,以体积比100:0至80:20的二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱,并收集硅胶板薄层层析中二氯甲烷-甲醇混合溶剂体积比95:5展开时,比移值为0.4~0.6,且酸水解-茚三酮显色法检测呈阳性的流份,合并得到总环孢菌素;
将总环孢菌素进行反相层析,以体积分数80%的甲醇进行洗脱,得到环孢菌素A。
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