[发明专利]一种高产环孢菌素的植物内生镰刀菌及其应用有效

专利信息
申请号: 202110514713.X 申请日: 2021-05-12
公开(公告)号: CN113151013B 公开(公告)日: 2022-06-21
发明(设计)人: 徐良雄;李丰名;杨鑫娜;吕镇城;彭永宏;钟志娟 申请(专利权)人: 惠州学院
主分类号: C12N1/14 分类号: C12N1/14;C12P21/04;C07K7/64;C07K1/20;C07K1/16;C12R1/77
代理公司: 北京力量专利代理事务所(特殊普通合伙) 11504 代理人: 郭大为
地址: 516000 *** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 高产 菌素 植物 镰刀 及其 应用
【权利要求书】:

1.一种高产环孢菌素的植物内生镰刀菌的发酵方法,其特征在于,包括以下步骤:

将镰刀菌(Fusarium sp.)HU0298接种于PDA培养基中活化培养,得到活化好的镰刀菌(Fusarium sp.)HU0298菌种,其中,培养温度为20~30℃,活化培养时间为3~5天;

将活化好的镰刀菌(Fusarium sp.)HU0298菌种接种到PDB培养基中振荡培养,得到一级种子液,其中,培养温度为20~30℃,振荡培养时间为1~3天;

将一级种子液接种至PDB培养基中培养1~3天得到二级种子液,然后将二级种子液接种至固体培养基进行固体发酵培养,得到固体发酵物,其中,固体发酵的培养温度为20~30℃;

所述固体培养基的组分设置为以下情况:

所述固体培养基包括:组分A和蒸馏水,所述组分A与蒸馏水的料液比为1:1~5,所述组分A为玉米、大米、小麦、麦麸和椰子油饼中的任意一种;

或,所述固体培养基包括:组分B、组分C和蒸馏水,所述组分B、所述组分C和蒸馏水的料液比为1:1:1~5,当所述组分B为玉米时,所述组分C为小麦、麦麸和椰子油饼中的任意一种,当所述组分B为麦麸时,所述组分C为椰子油饼;

或,所述固体培养基包括:玉米、蒸馏水和组分D,所述组分D为甘油、麦芽提取物、大豆蛋白胨、酵母提取物和酪蛋白胨中的任意一种,所述玉米、所述蒸馏水和所述组分D之间的料液比为1:1:0.01~0.05;

其中,所述高产环孢菌素的植物内生镰刀菌为镰刀菌(Fusarium sp.)HU0298,所述高产环孢菌素的植物内生镰刀菌于2021年1月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为GDMCC No.61466。

2.一种高产环孢菌素的植物内生镰刀菌制备环孢菌素A的方法,其特征在于,包括以下步骤:

使用权利要求1所述的高产环孢菌素的植物内生镰刀菌的发酵方法进行发酵培养,得到发酵培养物;

将发酵培养物用浸提液进行浸提,过滤后浓缩得到浸膏,其中,所述浸提液为95%乙醇或乙酸乙酯;

将浸膏进行硅胶柱层析,以体积比100:0至80:20的二氯甲烷-甲醇混合溶剂进行梯度洗脱,并收集硅胶板薄层层析中二氯甲烷-甲醇混合溶剂体积比95:5展开时,比移值为0.4~0.6,且酸水解-茚三酮显色法检测呈阳性的流份,合并得到总环孢菌素;

将总环孢菌素进行反相层析,以体积分数80%的甲醇进行洗脱,得到环孢菌素A。

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