[发明专利]一种能够快速检测TMAO生物标志物的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种能够快速检测TMAO生物标志物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（S1）建立标准曲线：取空白血浆样品，加入甲醇后进行涡旋振荡，然后装入离心机进行离心处理，取上清液加水稀释；然后加入TMAO和内标，配制成一系列含内标浓度相同含TMAO浓度不同的标准样品；通过液相色谱-质谱联用对一系列标准样品进行测试，计算得到各标准样品对应的TMAO峰面积与内标峰面积的比值（Y）和各标准样品对应的TMAO浓度与内标浓度的比值（X），作出Y随X的变化曲线，即为标准曲线；

（S2）预处理样品检测：通过液相色谱-质谱联用对预处理血浆样品进行检测，计算得到TMAO峰面积与内标峰面积的比值，代入标准曲线，得到预处理样品中TMAO浓度与内标浓度的比值；根据预处理过程中的稀释倍数计算得到原始血浆样品中TMAO的浓度；

血浆样品预处理方法为：取血浆样品，加入含有内标的甲醇溶液后进行涡旋振荡，然后装入离心机进行离心处理，取一定量上清液加水稀释得预处理血浆样品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，血浆样品预处理方法为：取血浆样品加入含有内标的甲醇溶液进行蛋白沉淀，离心处理使样品分层，再加水稀释。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，血浆样品预处理方法为：取血浆样品35μL，加入100μL含有内标的甲醇溶液后进行涡旋振荡30-45s，然后装入离心机进行离心处理，离心机分离因数RCF为3600-8000，取50μL上清液加入200μL去离子水稀释得预处理血浆样品。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，血浆样品预处理过程中，内标的甲醇溶液为d9-TMAO浓度 30ng/mL的甲醇溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（S1）中，取空白血浆样品350μL，加入1000μL甲醇后进行涡旋振荡30-45s，然后装入离心机进行离心处理，离心机分离因数RCF为3600-8000；取500μL上清液加入2000μL去离子水稀释，然后加入TMAO，用水逐步稀释得到10个含不同浓度的TMAO的溶液，TMAO浓度分别为：10、25、55、80、100、200、400、500、800、1000ng/mL；每个溶液各取300μL，各加入100μL含30ng/mL的d9-TMAO的甲醇溶液，得到一系列标准样品。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱条件如下：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18液相色谱柱；

流动相：体积比为88:12的乙腈与0.1%甲酸水溶液；

流速：0.3-0.5mL•min^-1；

柱温：35-40℃；

进样量：5μL；

洗脱方式：等度洗脱。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，质谱条件如下：

质谱仪：三重四极杆质谱仪；

扫面模式：电喷雾正离子模式；

采集模式：质谱多反应监测（MRM）；

离子源电压：4000 V；

离子源温度：400 ℃；

气帘气：25 psi；

雾化气（gas 1）：50 psi；

辅助气（gas 2）：40 psi。

8.一种试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：

试剂A：d9-TMAO浓度为 30ng/mL的甲醇溶液；

系列试剂B：如权利要求5所使用的标准样品。

9.根据权利要求8所述的试剂盒的用途，其特征在于，所述试剂盒在液质联用检测血液中TMAO含量时使用，试剂A用作内标物，系列试剂B用作标准样品以获得确定色谱条件下的标准曲线。