[发明专利]一种贝莱斯芽孢杆菌及用途

说明书

本发明公开了一种贝莱斯芽孢杆菌及用途，配方包括：贝莱斯芽孢杆菌；组分的质量百分比是：100％的贝莱斯芽孢杆菌；包括具有产纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、β‑葡聚糖酶和过氧化氢能力的贝莱斯芽孢杆菌，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、齐整小核菌、链格孢菌、青枯雷尔氏菌、根癌农杆菌、胡萝卜软腐欧文式杆菌、橘青霉菌、霜霉菌等食源性病原菌和植物病原菌具有良好的拮抗作用，有效抑制了病原菌的滋生，在植物促生、病害防控、环境保护、食品生产等方面具有广泛用途；该发明通过两道拮抗筛选，从而提高了制备过程中的筛选力度，增强了培育产品的拮抗活性，有效抑制了病原菌的滋生，提升了贝莱斯芽孢杆菌的质量。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种贝莱斯芽孢杆菌及用途。

背景技术

酸菜作为我国传统的蔬菜发酵制品，具有清脆爽口，开胃促消化等优点，深受广大民众喜爱。酸菜中微生物种群繁多，其中主要包括乳酸球菌属、乳酸链球菌属、乳杆菌属、双歧杆菌属和芽孢杆菌属等，其中，贝莱斯芽孢杆菌广泛存在于自然界中，人畜无害并对很多病原微生物有良好的拮抗作用，具有抗菌谱广、生长迅速、易分离培养、抗逆性强和生物安全性高等优点，主要应用于农业、食品、工业、医学、冶金、林业、环保以及军事等领域。

然而，现有的贝莱斯芽孢杆菌制备方法大多筛选力度不足，培育的贝莱斯芽孢杆菌拮抗活性较低，无法有效抑制病原菌的滋生，影响了贝莱斯芽孢杆菌的质量，且生理生化鉴定和分子鉴定不全面，制备精度低，影响了贝莱斯芽孢杆菌的纯度，降低了贝莱斯芽孢杆菌的抑菌率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种贝莱斯芽孢杆菌及用途，以解决上述背景技术中提出筛选力度不足、鉴定不全面以及制备纯度低的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种贝莱斯芽孢杆菌，配方包括：贝莱斯芽孢杆菌；组分的质量百分比是：100％的贝莱斯芽孢杆菌。

一种贝莱斯芽孢杆菌的制备方法，包括以下步骤：步骤一，取液稀释；步骤二，涂布培养；步骤三，形态鉴定；步骤四，分离纯化；步骤五，拮抗初筛；步骤六，拮抗复筛；步骤七，生理鉴定；步骤八，分子鉴定；步骤九，扩增培育；

其中上述步骤一中，取适量的酸菜汁，用倍比稀释法分别稀释至10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5和10^-6，等量称取后得到多个稀释液；

其中上述步骤二中，用无菌玻璃涂布棒对步骤一中得到的多个稀释液分别进行等量蘸取，并均匀涂布到固体培养平板上，恒温培养，得到多个单菌落；

其中上述步骤三中，用接种环从步骤二中得到的单菌落里挑取适量的细菌，分别在固体培养平板上划线，恒温培养，观察菌落形状，并经革兰氏染色后在显微镜下观察，对菌落进行形态鉴定；

其中上述步骤四中，根据步骤三的鉴定结果，从步骤二中得到的多个单菌落里挑取出不同形态的，分别用划线平板法接种到固体培养平板上，纯化两次，得到纯化菌株；

其中上述步骤五中，以病原细菌为指示菌，接种到液体培养摇瓶中，恒温振荡培养，并使OD600为0.6～0.8，得到指示菌液，再按照1∶100的体积比量取对应量的指示菌液，倒在煮融后冷却至50℃的固体培养平板上混匀，用牛津杯点接上步骤四中得到的纯化菌株，凝固后恒温培养，测其抑菌圈直径，并以不点接纯化菌株为空白对照，筛选出对指示菌抑菌效果好的初筛拮抗菌；