[发明专利]一种头孢噻呋油混悬注射液的无菌检测方法

说明书

本发明公开了一种头孢噻呋油混悬注射液的无菌检测方法，先进行预处理：将头孢噻呋摇匀后加入青霉素酶，混合均匀，制得混合液；将混合液分别加入到含吐温‑80的硫乙醇酸盐流体培养基和含吐温‑80的改良马丁培养基中，再次摇匀后进行恒温处理，得供试品溶液。恒温处理后将供试品溶液直接接种进行无菌检测。该无菌检测方法对含量为5%和10%的头孢噻呋油混悬注射液效果最佳。该方法能有效提高检测数据的准确性和重现性，可操作性强，且专属性好，油性辅料对无菌检查无干扰。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种兽用药物制剂的无菌检测方法，尤其涉及头孢噻呋油混悬注射液的无菌检测方法。

背景技术

头孢噻呋（Ceftiofur）别名赛得福，是美国于20 世纪80 年代开发成功的兽医专用的第三代头孢菌素，该药1988 年在美国首次上市，由于其优良的抗菌活性和药动学特征，已陆续被美国、加拿大、日本及欧洲一些国家正式批准用于肉牛、奶牛、马、猪、羊的呼吸道疾病的治疗。其化学名称为(6R,7R)-7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)(甲氧基亚胺基)乙酰胺基]-3-[(2-呋喃基羰基)硫甲基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-甲酸，分子式C19H17N5O7S3，分子量523.56，化学结构式见如下图。头孢噻呋具有氨基和羧基，故为两性化合物，其在强酸、强碱及高温条件下易分解，但其钠盐及盐酸盐较稳定。

头孢噻呋是动物专用的第三代头孢菌素类抗生素，其抗菌谱广，抗菌活性强，对革兰阳性菌、革兰阴性菌及厌氧菌均有强大的抗菌活性，其中对革兰阳性菌与第一代头孢菌素比较相近或较弱，对革兰阴性菌如大肠杆菌、伤寒沙门杆菌、多杀性和溶血性巴氏杆菌、链球菌等具有强大的抗菌活性。适用于各种敏感菌引起的呼吸道、泌尿道等感染，尤其适用于防治大肠杆菌、沙门杆菌、绿脓杆菌、葡萄球菌等引起的鸡苗早期死亡，初生仔猪的剪脐带、打耳号、剪齿、剪尾等引起的伤口感染，以及嗜血性放线杆菌引起的猪传染性胸膜肺炎、猪链球菌病、猪肺疫及仔猪黄白痢等。

将头孢噻呋与注射用油配制成混悬型注射液，具有良好的抗菌作用，被广泛用于临床应用，目前国家批准的头孢噻呋油混悬制剂主要有盐酸头孢噻呋油混悬注射液、头孢噻呋油混悬注射液和头孢噻呋晶体注射液三种。作为注射用药，按照《中华人民共和国兽药典》2015版相关要求，需要检测无菌。无菌检查法包括滤膜过滤法和直接接种法，头孢噻呋油混悬注射液属于β-内酰胺类的混悬液，若采用滤膜法，头孢噻呋无法通过滤膜，所以头孢噻呋油混悬注射液的无菌检查方法采用直接接种法，利用青霉素酶解头孢噻呋，使其失活，然后采取直接接种法进行无菌检查。目前有文件（CN201310665166.0）记载了头孢噻呋类油混悬型注射液无菌检测方法采用0.1%吐温-80%的蛋白胨溶液进行前处理，这种处理方式在药物无菌检测培养14天时，观察现象不明显，无法准确判断阴性或阳性结果，需要再进行一步接菌处理，即取培养液接种于斜面培养基上，细菌培养2日，真菌培养3日，依法检查。不仅耗费人力，增加污染的风险，也延长了检测周期。针对头孢噻呋油混悬注射液，需要建立一种准确度高、操作便捷的无菌检测方法。

发明内容

基于以上存在的问题，本发明旨在提供一种头孢噻呋油混悬注射液的无菌的检测方法。该检测方法为直接接种法，操作便捷，灵敏度高，试验结果容易观察判断、实用性强。

本发明提供的一种头孢噻呋油混悬注射液无菌检测方法是先进行预处理：将头孢噻呋摇匀后加入青霉素酶，混合均匀，制得混合液；将混合液分别加入到含吐温-80的硫乙醇酸盐流体培养基和含吐温-80的改良马丁培养基中，再次摇匀后进行恒温处理，得供试品溶液。将前置处理得到的供试品溶液恒温处理后直接接种于适合相应菌生长的培养基中，培养后依法检测，具体检测方法依据中国兽药典相关规定进行。该无菌检测方法对含量为5%和10%的头孢噻呋油混悬注射液效果最佳。

本发明提供的一种头孢噻呋油混悬注射液无菌检测方法的预处理步骤包括：