[发明专利]一种测定土壤中丙烯酰胺的检测方法

权利要求书

1.一种测定土壤中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、样品前处理：准确称取10.00g土壤样品于50mL带盖聚丙烯离心管中，用20mL超纯水超声提取30min，8000r/min离心3min，取上清液经0.45μm水系针式滤器过滤后待测。

S2、在最佳的液相色谱仪条件下检测土壤中的丙烯酰胺：

色谱条件为：色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6×100mm，3.5μm)；流动相甲醇：水(体积比为5：95)，流速0.5mL/min；柱温30℃；检测波长210nm；进样量：5μL。

S3、通过控制变量法在不同流动相的比例、改变流速和检测波长下进行色谱分离实验，以验证最佳液相色谱条件，控制变量法下的液相色谱条件可采用以下三种方法：

第一种：固定其他液相色谱条件不变：流速0.5mL/min；柱温30℃；检测波长210nm；进样量：5μL；改变流动相：甲醇：水(10：90)；甲醇：水(5：95)；乙腈：水(5：90)；乙腈：水(10：90)；

第二种：固定其他液相色谱条件不变：流动相甲醇：水(体积比为5：95)；柱温30℃；检测波长210nm；进样量：5μL；改变流速：0.3-0.6mL/min；

第三种：固定其他液相色谱条件不变：流动相甲醇：水(体积比为5：95)；流速0.5mL/min；柱温30℃；进样量：5μL；改变检测波长：190-400nm；

S4、在步骤S2的实验下，获得丙烯酰胺的线性方程、相关系数和检出限：

S41、准确称取纯度为99.9％为丙烯酰胺标准品到50mL容量瓶中，用超纯水溶解、稀释并定容，配制成浓度为1000μg/mL的丙烯酰胺标准溶液；然后取适量丙烯酰胺标准溶液，用超纯水稀释并定容，配制成浓度为100μg/mL丙烯酰胺标准使用液；

S42、分别取100μg/mL的丙烯酰胺标准使用液至空白超纯水中，逐级稀释配制成质量浓度为0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL和5.00μg/mL的系列标准工作溶液；

S43、从低浓度到高浓度依次通过液相色谱仪进行分析，以保留时间定性，以峰面积定量，得到它们的线性方程和相关系数；

S44、丙烯酰胺检出限计算：分别在10g经处理后的石英砂(代替空白土壤样品)加入40μL浓度为10μg/mL的丙烯酰胺标准溶液，再用20mL超纯水超声提取30min，离心取上清液待测，按照试验方法重复测定7次，计算测定值的标准偏差S，并以3倍标准偏差计算土壤样品的检出限：

其中，检出限的计算公式为：MDL＝t_(n-1,0.99)*S，

其中，MDL—方法检出限；

t—自由度为(n-1)，置信度为99％时的t分布为(n＝7，t＝3.143)；

S—n次平行测定的标准偏差；

n—样品的平行测定次数；

S5、在步骤S2的实验条件下，对空白土壤样品进行加标：空白土壤样品加入丙烯酰胺后，按照步骤S2全程序测定6次，测得空白土壤样品加标后的精密度及准确度；

S6、在步骤S2的实验条件下，对经处理后的粉质粘土进行加标：取粉质粘土样品加入丙烯酰胺后，按照步骤S2全程序测定6次，测得粉质粘土样品加标后的精密度及准确度。

2.根据权利要求1所述的一种测定土壤中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，控制变量法下的第一种所述流动相比例分别为甲醇：水(10：90)；甲醇：水(5：95)；乙腈：水(5：90)；乙腈：水(10：90)。

3.根据权利要求1所述的一种测定土壤中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，控制变量法下的第二种所述流速分别为0.3mL/min、0.4mL/min、0.5mL/min、0.6mL/min。

4.根据权利要求1所述的一种测定土壤中丙烯酰胺的检测方法，其特征在于，在步骤S3中，控制变量法下的第三种所述检测波长分别为190nm、200nm、210nm。