[发明专利]一种香蕉种质资源离体增殖的保存方法

说明书

本发明公开了一种香蕉种质资源离体增殖的保存方法，该方法在室温18～32℃条件下，应用多种植物生长调节剂不同浓度组合配制出的离体保存培养基，让香蕉吸芽或丛生芽在培养基中缓慢增殖生长，芽壮，每个转接周期的时间长，最长达17个月。该方法不仅节省了转接所需的材料费、人工费，还节省了培养室内空调的电费等，且保存的香蕉种质资源因不受低温及抑制剂或延缓剂的影响，长势好，离体培养结束后，种苗在大田种植中农艺性状稳定，可正常开花结果。本发明方法具有操作简单、成本低等优点，是一种安全高效的香蕉种质资源离体保存的方式。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体是一种香蕉种质资源离体增殖的保存方法。

背景技术

香蕉是世界上主要水果作物和重要粮食作物之一，也是中国最重要的热带、亚热带水果。香蕉种植历史悠久，但产业发展中存在栽培品种单一化以及病虫害、冷害等生物和非生物逆境胁迫等问题，应用种质创新出诸多抗逆性强的新品系，丰富香蕉种质资源，是解决产业问题的有效途径。种质资源作为香蕉科技创新和现代种业发展的物质基础，收集、保存及利用好种质资源，对于香蕉产业发展尤为重要。

一般作物的种质资源保存分为种子、田间和离体培养三种保存方式。香蕉种质资源长期有效保存的方法探索：首先，种子保存不适用于香蕉种质资源，因为用于生产的香蕉品种为三倍体，一般不产生种子，以无性繁殖方式繁育种苗；其次，田间保存占用大量的土地和劳动力，成本高，且易受外界不利因素影响，造成香蕉种质资源流失；第三，离体培养保存常用于香蕉种质资源保存，培养条件可控，占用面积小，还可避免田间诸多不利因素，但由于香蕉的继代培养周期时间短，仅为20天左右，频繁转接，易造成培养苗的代数过高，增加了种质资源变异的几率。

目前，香蕉种质资源离体培养保存，常以抑制组培苗生长来达到较长时间保存的目的，以低温与生长抑制剂或延缓剂结合的方法最为常用。然而香蕉属于热带作物，对低温敏感，易受到冷害。因此，香蕉组培苗在低温加抑制剂或延缓剂环境影响下长时间的培养保存，芽的基部褐化变黑现象严重，生长点易受伤害，基本无增殖，长势差，电费成本较高；且香蕉种质资源在结束离体保存时还能否正常生根与大田生长也都是值得关注的问题。

发明内容

针对上述香蕉种质资源离体培养保存中存在的问题，本发明提供一种香蕉种质资源离体增殖的保存方法，该方法在室温条件下（18～32℃），应用多种植物生长调节剂不同浓度组合配制出的离体保存培养基，让香蕉吸芽或丛生芽在培养基中缓慢增殖生长，芽壮，每个转接周期的时间长，最长达17个月。该方法不仅节省了转接所需的材料费、人工费，还节省了培养室内空调的电费等，且保存的香蕉种质资源因不受低温及抑制剂或延缓剂的影响，长势好，离体培养结束后，种苗在大田种植中农艺性状稳定，可正常开花结果。

实现本发明目的的技术方案是：

一种香蕉种质资源离体增殖的保存方法，包括以下步骤：

（1）外植体处理及丛生芽诱导：

取无病虫害且健壮的香蕉吸芽，用刀削去外层，留最大处直径为10 cm的吸芽，将吸芽外表喷洒75%酒精灭菌后，在超净工作台上，再用刀将香蕉吸芽外层削去，剥成最大处直径2 cm的嫩小吸芽，切去顶部1/3，剩下的吸芽平均切分成两半，接入丛生芽诱导培养基中培养；3个月时，吸芽生长点处长出1个小芽；6个月时，芽长大，基部开始长出小芽，17个月时形成丛生芽；

所述丛生芽诱导培养基为：MS+芸苔素内酯0.1 mg/L+ 6-BA 0.3 mg/L + TDZ 0.2mg/L+ZT 0.2 mg/L + 2,4-D 0.5 mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0；

（2）丛生芽离体保存培养：