[发明专利]测定护肝类中成药中的谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷的方法

说明书

本发明公开了测定护肝类中成药中的谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷的方法，样品经水溶解涡旋超声提取后，以Atlantis T3柱(4.6mm×250mm，5μm)分离；流动相为甲醇‑0.02mol/L乙酸铵溶液(用冰醋酸调节pH＝4.7)(5:95)；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：208nm。结果：各组分在20‑300μg/ml浓度范围内具有良好的线性，各化合物的检出限为5μg/ml，回收率为81.2‑117.4％，相对标准偏差为1.8‑7.2％，符合日常检测的要求。该方法简单快捷，准确度高，可用于检测中成药中非法添加化学药物的日常监管工作。

【技术领域】

本发明涉及药品检测技术领域，涉及测定护肝类中成药中的谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷的方法，具体涉及高效液相色谱法(HPLC)同时测定护肝类中成药中非法添加3种化学成分(谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷)的检测方法。

【背景技术】

肝炎是各种原因导致的肝脏炎症的统称，其病因包括病毒、细菌、自身免疫、寄生虫、酒精、药物等，由此可分为病毒性肝炎、酒精性肝炎、脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎以及药物性肝炎，而我国最常见的是病毒性肝炎，病毒性肝炎有甲、乙、丙、丁、戊五种肝炎病毒，最常见的为慢性乙型肝炎，其传染极强，如不及时治疗可继发为肝硬化和原发性肝癌，是我国当前最严重的健康问题之一。

在各种利益的推动下，很多不法商家为了获取暴利，在中成药中非法添加化学药品的情形方兴未艾，某些非法添加的化学药品在患者使用后可能产生不同程度的毒副作用，需在药师、临床医师的正确指导下服用。我国对中成药的监管还在不断改进，导致不法商家有机可乘，因此非法添加的化学药品对患者和社会的发展都造成了严重的影响。

目前，非法添加的化学药品检测方法主要有传统物理化学鉴别法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱法-质谱法(HPLC-MS)、红外光谱法(IR)、胶束电动毛细管色谱法(MECC)、拉曼光谱法。现已有对谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷的检测方法的研究，例如：薄层色谱和高效液相色谱联用测定暗纹东方纯肌肉中肌肽和谷胱甘肽的含量，张梅秀等，天然产物研究与开发2012，24：928-932，通过薄层色谱(TLC)与高效液相色谱(HPLC)联用技术鉴定了暗纹东方鲀肌肉中存在肌肽和谷胱甘肽，同时利用高效液相色谱法测定了肌肽和谷胱甘肽(GSH)的含量，薄层层析采用的展开剂为正丁醇:乙酸:水(4:2:1)，层析板为硅胶板，高效液相色谱利用Kromasil C18反相柱分析，流动相为10％的纯乙腈和90％含有0.05％三氟乙酸的超纯水，结果表明：通过薄层色谱和高效液相色谱鉴定了暗纹东方纯肌肉中肌肽和谷胱甘肽。但该研究是针对暗纹东方鲀肌肉中存在肌肽和谷胱甘肽，并没有涉及如何测定护肝类中成药中非法添加的谷胱甘肽和肌苷。又如：高效液相色谱法测定人血浆中硫普罗宁的浓度，郝二军等，河南师范大学学报(自然科学版)，第39卷第4期，2011年7月，建立了以反相高效液相色谱法测定人血浆中硫普罗宁浓度的方法，采用Agilent C8(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，乙腈：水(用磷酸调pH至2.5)＝8：92(v/v)，为流动相，检测波长203nm，流速1.0ml/min，硫普罗宁浓度在1.5-1 600μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度呈良好线性关系(r＝0.999 8)，提取回收率在74.26-76.35％，方法回收率在101.95-106.86％，2.5、50和1 000μg/ml 3种浓度的日内、日间RSD分别为2.83-3.75％、5.92-6.85％均小于10％。但该研究是针对人血浆中硫普罗宁浓度，并没有涉及如何测定护肝类中成药中非法添加的谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷。

因此，针对护肝类中成药中非法添加3种化学成分(谷胱甘肽、硫普罗宁、肌苷)的情况，开展高效液相色谱法(HPLC)检测很有必要。

【发明内容】