[发明专利]一种基于混合抗体的胶体金法快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒

说明书

一种基于混合抗体的胶体金法快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒，包括底板、样品垫、结合垫、包被膜和吸收垫；结合垫上负载有胶体金标记的混合捕获抗体，混合捕获抗体包含有抗新型冠状病毒N蛋白单克隆抗体I和抗新型冠状病毒S蛋白单克隆抗体I；包被膜设有检测区和质控区，每平方厘米检测区负载有混合检测抗体，混合检测抗体包含有抗新型冠状病毒N蛋白特异性单克隆抗体II和抗新型冠状病毒S蛋白特异性单克隆抗体II，质控区负载有混合重组蛋白，混合重组蛋白包含有重组IgG Fc蛋白I和重组IgG Fc蛋白II。本发明的检测结果快速准确，特异性强，灵敏度高，可以显著提高新型冠状肺炎的检出率。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种基于混合抗体的采用胶体金法快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒。

背景技术

2019新型冠状病毒(COVID-19)，因2019年发生病毒性肺炎病例而被发现，2020年1月12日被世界卫生组织命名。和中东呼吸综合征病毒(MERS)以及严重急性呼吸综合征病毒(SARS)都属于β冠状病毒，属于人畜共患病原体，可引起动物与人之间的感染，也可引起人与人之间的感染。COVID-19含有棘突(S)蛋白、膜(M)蛋白、和核衣壳(N)蛋白等标志性蛋白。为了防止病毒的扩散和获得有效的治疗，针对病毒快速准确的诊断就显得尤为重要。

目前针对新型冠状病毒的检测方法主要有核酸检测、抗体检测和抗原检测。核酸检测，具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，是确诊新冠肺炎的“金标准”，但对样本的处理和运输需要实施一整套非常严格的流程，对检测设备、场地及操作人员都有极高的要求，且检测用时长，因此具有一定的局限性；抗体检测，虽然具有方便快捷、检测用时短，可以弥补核酸检测出现假阴性而造成漏诊的缺点。但又常常由于个别患者血液中含有类风湿因子、自身抗体或肿瘤细胞等因素而易出现假阳性，以及由于人在感染新冠病毒后需要两周左右才能产生抗体，故此检测方法存在一定的漏检窗口期；抗原检测，具有诊断快速、准确、对设备和人员要求低，因此可应用于社区、基层医院、机场、海关甚至家庭等基层的早期初步筛查。但由于新型冠状病毒主要侵犯肺泡等下呼吸道，所以往往从鼻咽、口咽等上呼吸道的取样中所含病毒数量较少，而目前市场上存在的抗原检测试剂盒通常采用单一抗原特异性抗体作为检测试剂，因此容易出现对样本中的抗原（病毒蛋白）敏感性不够而造成漏检，从而出现假阴性。

因此，亟需一种更加方便快捷、准确有效的诊断新型冠状病毒抗原检测试剂盒用于早期的筛查诊断。

发明内容

针对现有技术中出现的种种问题，本发明提供了一种基于混合抗体的胶体金法快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒，从而成功地解决了现有技术检测新型冠状病毒时间长、准确度不高的技术问题。

本发明提供的这种准确灵敏基于混合抗体快速诊断新型冠状病毒抗原的检测试剂盒，包括底板、样品垫、结合垫、包被膜和吸收垫，沿待测液体样本流动方向，样品垫、结合垫、包被膜和吸收垫依次固定于底板上，所述的样品垫的一端和所述的结合垫的一端紧密连接，所述的结合垫的另外一端和所述的包被膜的一端紧密连接，所述的包被膜的另外一端和所述的吸收垫的一端紧密连接；

所述的结合垫上负载有1.2-1.8μg/cm²胶体金标记的混合捕获抗体，所述的混合捕获抗体包含有抗新型冠状病毒N蛋白抗体I和抗新型冠状病毒S蛋白抗体I，将抗新型冠状病毒N蛋白抗体I用包被缓冲液(10mM pH7.2的PBS)稀释至浓度为15-20μg/ml与胶体金溶液（pH7.4）混匀反应得到第一标记抗体；同样将抗新型冠状病毒S蛋白抗体I用包被缓冲液(10mM pH7.2的PBS)稀释至浓度为15-20μg/ml与胶体金溶液（pH7.4）混匀反应得到第二标记抗体；将第一标记抗体与第二标记抗体按80% : 20%的体积比混和得到所述的混合捕获抗体；