[发明专利]一种皮肤衰老蛋白标志物—1433T蛋白及其无创性提取方法

说明书

本发明公开了一种皮肤衰老蛋白标志物—1433T蛋白及其无创性提取方法。公开了1433T蛋白在辅助判断衰老程度中的应用及提取检测方法，旨在从根源上找到导致皮肤衰老的内在因素，在皮肤老化外在表现出现前提前干预皮肤衰老，另外可以正确判断皮肤的衰老程度以及判断衰老的生理年龄是否与实际年龄相符，为美容或者医学美容提供参考和方向。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种皮肤衰老蛋白标志物—1433T蛋白及其无创性提取方法。

背景技术

皮肤老化，也即皮肤衰老，是指皮肤功能衰老性损伤，使皮肤对机体的防护能力，调节能力等减退，由此皮肤不能适应内外环境的变化，出现颜色、色泽、形态、质感等外观整体状况的改变。皮肤的老化分为内源性老化和外源性老化。内源性老化是指皮肤随年龄增长的自然老化。表现为皮肤变白，出现细小皱纹、弹性下降、皮肤松弛等。外源性老化的最主要原因是日晒所致的光老化。表现为皱纹、皮肤松弛、粗糙、淡黄或灰黄色的皮肤变色、毛细血管扩张、色素斑形成等。

随着人们生活水平的提高，人们越来越重视皮肤保养，但通常只是关注皮肤衰老的外在表现，比如皱纹、色斑、以及毛孔粗细程度等信息，并由此来判断皮肤的衰老程度，这种判断皮肤衰老程度的方法不能从根源上找到导致皮肤衰老的内在因素，无法在皮肤老化外在表现出现前提前干预皮肤衰老，另外正确判断皮肤的衰老程度以及判断衰老的生理年龄是否与实际年龄相符，也是美容或者医学美容的前提。

1433T蛋白与“衰老”有关。14-3-3蛋白是一类高度保守的蛋白，广泛存在于不同的真核细胞中。14-3-3种蛋白质具有多种同工型，例如β，ε，η，γ，τ，σ，ζ，在不同的组织中有不同的表达水平。它拮抗内核膜上的生长因子信号转导，后者是多器官系统中病理性纤维化的重要驱动力。

目前没有将1433T蛋白(包含3个LEM域)用于辅助判断皮肤衰老程度的先例。

发明内容

一种无创提取皮肤中1433T蛋白的方法，该方法包括以下步骤：

(1)受试者表皮皮肤样本取样：将3M医用胶贴贴于前臂曲侧部位，1分钟后，轻轻揭下3M胶贴片，得到胶带状皮肤样品；

(2)干燥的肽段样品的获得：1)将胶带状皮肤样品切成小块，沉积在玻璃板上在转移到离心管；

2)添加不含SDS的适量裂解缓冲液样品，加入2mM EDTA，1XCocktail，然后放在冰5分钟，然后，添加10mM DTT，将样品浸泡过夜；

3)在离心力25,000g，4℃下离心15分钟，回收上清液并用10mM处理DTT在56℃的水浴中放置1小时；

4)然后用55mM IAM处理，在室温黑暗中孵育45分钟，并在25,000g，4℃下离心15分钟，得到最终的蛋白质溶液上清液；蛋白质浓度使用Bradford方法进行测量，提取的蛋白质通过12％的SDS-PAGE进行质控；每份样品取100μg蛋白质，加入胰蛋白酶并于37℃下水解4小时；随后再次以相同的比例添加胰蛋白酶在37℃下酶解8小时；水解产物使用Strata X色谱柱对多肽进行脱盐并在真空下干燥，即得到干燥的肽段样品。

优选地，表皮皮肤样本中1433T蛋白基于质谱的相对含量的测定方法，包括如下步骤：(1)受试者表皮皮肤样本取样：将3M医用胶贴贴于前臂曲侧部位，1分钟后，轻轻揭下3M胶贴片，得到胶带状皮肤样品；

(2)干燥的肽段样品的获得：1)将胶带状皮肤样品切成小块，沉积在玻璃板上在转移到离心管；

2)添加不含SDS的适量裂解缓冲液样品，加入2mM EDTA，1XCocktail，然后放在冰5分钟，然后，添加10mM DTT，将样品浸泡过夜；

3)在离心力25,000g，4℃下离心15分钟，回收上清液并用10mM处理DTT在56℃的水浴中放置1小时；