[发明专利]一种人脐带间充质干细胞制剂及其应用

说明书

本发明提供了一种人脐带间充质干细胞制剂及其应用；所述细胞制剂借助纤维蛋白凝胶作为细胞移植时的支架，为hUC‑MSCs细胞提供更利于存活的三维环境，有利于其长时间发挥促修复作用。本发明还涉及带有绿色荧光标记的人间充质干细胞及其应用。具体的通过采用EGFP对hUC‑MSCs进行标记，实现了移植细胞在体内的示踪及作用机制的探索。并且采用EGFP对hUC‑MSCs验证了本发明提供的hUC‑MSCs细胞制剂能够显著加速糖尿病创面的愈合，促进再上皮化。

技术领域

本申请属于干细胞应用技术领域，尤其是涉及一种人脐带间充质干细胞制剂及其应用；还涉及一种带有绿色荧光标记的人间充质干细胞及其应用。

背景技术

糖尿病是一种慢性代谢性疾病，其发病率正逐年增加，现阶段影响着全球9.5％的人群，预计到2030年，影响的人数或将突破全球人口的50％。糖尿病足溃疡(Diabetic footulceration,DFU)是糖尿病的主要并发症之一，国际糖尿病足工作组(The InternationalWorking Group on the Diabetes Foot,IWGDF)将其定义为糖尿病患者足踝以下的全层皮肤损伤，这种损伤与糖尿病神经病变和周围动脉疾病相关。

据估计，平均每30s全球就有一个人因为糖尿病足导致截肢(参见Boulton AJ,Vileikyte L,Ragnarson-Tennvall G,Apelqvist J(2005).Lancet(London,England)366(9498):1719-1724.)。然而，局部的缺血、感染、神经病变和代谢紊乱会延迟足部伤口愈合，这对患者和临床医生来说都是治疗糖尿病足所面临的严峻挑战。糖尿病足不仅仅是医学问题，更是社会问题和经济问题。糖尿病足严重影响患者的生活质量乃至生命，同时治疗费用及相关社会经济问题给个人和国家带来沉重负担。

伤口愈合是一个动态的复杂过程，包括止血、炎症、增生、重塑四个重叠阶段，糖尿病伤口愈合是一个重要的问题，伤口的形成和外周血管疾病、创伤、感染和神经并发症之间互相交叉，所以DFU常发生在缺血、感染、神经病变和代谢紊乱的环境中，导致伤口愈合不良和治疗方案不佳(参见Bakker K,Apelqvist J,Lipsky BA,Van Netten JJ(2016)Diabetes/metabolism research and reviews 32Suppl 1:2-6.)。目前临床上传统干预糖尿病足的方法包括控制血糖、伤口局部反复清创、抗感染、改善下肢血供、持续负压吸引、高压氧干预等，对于下肢缺血严重的糖尿病足患者则采用下肢动脉腔内介入或下肢动脉旁路移植手术进行下肢血流重建(参见Lipsky BA,et al.(2016).Diabetes/metabolismresearch and reviews 32Suppl 1:45-74.和Lopes L,et al.(2018).Stem Cell ResTher 9(1):188.)，但以上各种方法均不能达到彻底治愈这一预期效果。

近年来，干细胞移植治疗糖尿病足的应用越来越广泛，移植后的干细胞能够促进新生血管的形成，改善和恢复肢体血流，改善缺血屏障。可用于移植的干细胞主要来源有骨髓、外周血、脐带血、脐带组织和脂肪，根据来源，可以将干细胞分成单核细胞(mononuclearcells,MNCs)、内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)或间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)。间充质干细胞作为干细胞的一个重要分支，其来源于发育早期的中胚层和外胚层，于1976年被Friedenstein首次发现，这些细胞有分化成成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞和神经细胞的潜力。