[发明专利]新型冠状病毒中和抗体的检测组合物、检测试剂、检测试剂盒

说明书

本发明涉及医学检测领域，特别涉及新型冠状病毒中和抗体的检测组合物、检测试剂、检测试剂盒。本发明涉及一种操作方便的新型冠状病毒中和抗体的检测试剂盒。15μL待测血清或血浆加入到试剂管中，与预先装入的荧光微球试剂进行混合，室温反应15分钟后，将混合物滴加到层析试纸卡上，10分钟后读取荧光值，通过读取检测线和质控线的荧光值，并与仪器内置的阈值进行比较，即可得出中和抗体阳性或者阴性的结果。该检测试剂盒操作简便，不使用活病毒，不用进行细胞培养，检测耗时短，可以在30分钟内完成全部检测。

技术领域

本发明涉及医学检测领域，特别涉及新型冠状病毒中和抗体的检测组合 物、检测试剂、检测试剂盒。

背景技术

人体感染新冠病毒或者免疫预防性疫苗后，会产生特异性抗体。其中中 和抗体是能够与病毒结合，阻止其进入宿主细胞的功能性抗体。人体内只有 产生足够高浓度的中和抗体，才能阻断病毒感染。由于个体差异，无论是自 然感染者还是接种过疫苗的群体，不同人血液中中和抗体浓度存在较大差异。 因此，中和抗体浓度测定对应疫苗免疫效果评价以及自然感染康复者是否有 再次感染的风险评估具有重要意义。

病毒膜蛋白与敏感细胞的受体结合是病毒完成感染的第一步。新型冠状 病毒膜表面的S蛋白的RBD(Receptor-binding domain，受体结合结构域)， 会与人细胞表面的ACE2发生结合，从而开启感染的过程。中和抗体会与病 毒膜表面的SRBD发生有效结合，并阻止SRBD与ACE2的结合，从而达到 阻断病毒感染进程的作用。

中和抗体测定的经典方法是微量中和法。使用一定量的活病毒与被检测 的抗体相混合，然后把混合物加入到对病毒敏感的细胞上，如果病毒没有被 抗体所阻断，即可以感染细胞，通过观察细胞病变或者通过检测病毒复制， 判断检测标本是否可以阻断病毒感染。

也可以使用假病毒系统进行中和抗体检测。原理是制备包含有新冠病毒 膜蛋白的假病毒。假病毒一般还含有荧光素酶或者荧光蛋白等报告基因。把 待测标本与假病毒混合后，把混合物加入到敏感细胞上，通过检测报告基因 判断是否有病毒感染。

微量中和实验是中和抗体检测方法的金标准，其结果最具有权威性。但 是该方法使用具有感染性的活病毒、生物安全等级高；使用细胞作为感染靶 标，试验周期长，不具备大规模使用的条件。假病毒中和试验由于使用的病 毒为改造过的病毒，不具有感染性，其安全要求比微量中和实验低，但是仍 需使用活细胞，同时仍需使用活细胞，试验周期长，不具备大规模使用的条 件，读取细胞荧光值需要大型仪器，也不可能进行大规模推广。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了新型冠状病毒中和抗体的检测组合物、检测试 剂、检测试剂盒。本专利所述方法仅有孵育，层析，读值3个步骤，使用简 便，用时短，可在30min之内完成检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了新型冠状病毒中和抗体的检测组合物，包括：鸡IgY荧光 微球标记物和SRBD抗原荧光微球标记物；

所述鸡IgY荧光微球标记物的制备方法包括：取活化的羧基乳胶微球与 鸡IgY偶联制得鸡IgY-羧基乳胶微球复合物，再与荧光染料偶联，制得鸡IgY- 羧基乳胶微球免疫荧光复合物，封闭、悬浮，制得所述鸡IgY荧光微球标记 物；

所述SRBD抗原荧光微球标记物的制备方法包括：取活化的羧基乳胶微 球，以赖氨酸作为中间搭桥分子，与荧光染料偶联制得羧基乳胶荧光微球； 活化所述羧基乳胶荧光微球，与SRBD抗原偶联，制得SRBD-羧基乳胶微球 免疫荧光复合物；封闭、悬浮制得所述SRBD抗原荧光微球标记物。

本发明提供了所述的检测组合物的制备方法，所述鸡IgY荧光微球标记 物的制备方法包括：取活化的羧基乳胶微球与鸡IgY偶联制得鸡IgY-羧基乳 胶微球复合物，再与荧光染料偶联，制得鸡IgY-羧基乳胶微球免疫荧光复合 物，封闭、悬浮，制得所述鸡IgY荧光微球标记物；