[发明专利]一种载siRNA纳米脂质杂化胶束及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种载siRNA纳米脂质杂化胶束，其中包含siRNA、由内向外包覆siRNA的阳离子脂质和脂质外层。本发明提供的siRNA可以选择性沉默三个主要导致胎盘过度表达的sFLT1的sFLT1 mRNA亚型，而不会降低全长FLT1的mRNA。带正电的阳离子脂质与带负电的siRNA结合形成复合物，提高了siRNA的稳定性。脂质外层包裹复合物后可以靶向胎盘，使siRNA在胎盘处积累，提高细胞对递送系统的摄取和促进内涵体的逃离。本发明还公开了所述胶束的制备方法和所述胶束在制备治疗子痫前期药物中的应用，为子痫前期的基因治疗提供了新思路。

技术领域

本发明属于药物技术领域，涉及一种载siRNA杂化胶束及其制备方法和应用。

背景技术

子痫前期是胎盘诱发的妊娠高血压疾病。全球每年因子痫前期造成近76000名孕产妇和500000婴儿死亡。子痫前期的妇女通常在妊娠20周后迅速发展为高血压，经常伴有蛋白尿、肾损伤、HELLP(溶血、肝酶升高和低血小板)综合征、癫痫发作、中风等症状，严重的会危及生命导致死亡。对胎儿的发育影响为子宫内生长受限、缺氧引起的神经系统损伤(例如脑瘫)，严重的导致死亡。目前对患有子痫前期的妊娠期妇女而言，除了终止妊娠外，并无有效的治疗方法。

子痫前期的母体症状是由抗血管生成蛋白的血清水平明显升高异常引起的，抗血管生成蛋白由细胞外血管内皮生长因子受体1(VEGFR1，也称为全长FLT1)对应的sFLT1蛋白分泌得到。sFLT1蛋白通过膜结合的VEGF受体FLT1清除循环中的VEGF和胎盘因子，并减弱血管内皮生长因子VEGF信号传导。血清sFLT1水平被认为是子痫前期的诊断和预后指标。

siRNA诱发的基因沉默相比于基因敲除或crisper基因编辑技术更加简单有效，已被广泛应用于疾病治疗。构建能够满足治疗需求的siRNA递送系统靶向胎盘治疗成为了研究热点。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种载siRNA纳米脂质杂化胶束，具有载药量和包封率高、安全性好、体内稳定性好、且可靶向胎盘等优点。

本发明的目的之二在于提供一种载siRNA纳米脂质杂化胶束的制备方法。

本发明的目的之三在于提供载siRNA纳米脂质杂化胶束在制备治疗子痫前期药物中的应用。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种载siRNA纳米脂质杂化胶束，所述纳米脂质杂化胶束siRNA、由内向外包覆siRNA的阳离子脂质体、脂质外层；

所述脂质外层由DSPE-PEG2000-FA、磷脂和胆固醇组成。

进一步地，所述siRNA的sense和antisense的核苷酸序列为分别为：5’-CAUCAUAGCUACCAUUUAUU-3’，5’-AAUAAAUGGUAGCUAUGAUG-3’。

进一步地，所述阳离子脂质为DLin-MC3-DMA。

进一步地，所述脂质体外层中DSPE-PEG2000-FA与磷脂的质量比为1～5-10，胆固醇与磷脂的质量比为1:4～6。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

所述载siRNA纳米脂质杂化胶束的制备方法，包括以下步骤：

1)将DLin-MC3-DMA溶液滴加至siRNA溶液中反应得到siRNA@DLin-MC3-DMA复合物；

2)将步骤1)得到的siRNA@DLin-MC3-DMA复合物与DSPE-PEG2000-FA、磷脂和胆固醇溶解于氯仿中，旋干溶剂，形成薄膜；再将薄膜重新分散到PBS溶液中，超声后进行高压均质循环，分离纯化得到载siRNA纳米脂质杂化胶束，记为FA-Lip-siRNA@DMD。