[发明专利]脐带来源间充质干细胞制备的通用型血小板制剂及方法

说明书

本发明公开了一种脐带来源的间充质干细胞制备的通用型血小板制剂及方法，所述方法包括：提供脐带来源的间充质干细胞；对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理，制备血小板制剂；其中，所述血小板为低免疫原性的通用型血小板。该制备方法便于操作，制剂便于保存，基本可以做到随用随取；此外，采用该方法制备的血小板制剂通用性好，能够有效减少免疫因素带来的输注无效的问题，有利于提高输注效率。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，尤其涉及一种脐带来源的间充质干细胞制备的通用型血小板制剂及方法。

背景技术

血小板输注(Platelet transfusion，PLT)疗法在临床上主要用于预防和治疗血小板数量减少或者功能异常所导致的出血，从而恢复和维持机体的止血和凝血功能。

现有技术中，临床输注用血小板制剂依赖献血志愿者通过血细胞单采机进行单采血小板获取，单采获取的血小板制剂保质期很短，一般在4到5天。至今，业内尚未开发出可以长期保存具有治疗效果的血小板方法，因此，考虑到检验和运输必需消耗的时间后，血小板制剂的体外保存时间一般在3天左右。与此同时，血小板输注在临床应用上还存在输注无效的情况，尽管首次输注时可以使用与患者不同类型的人白细胞抗原(HLA)的血小板，但当重复输血时，患者体内会产生针对相应HLA的特异性抗体，使得血小板在输注后迅速失效并被排斥。而且，血小板本身还具有特异性的人血小板抗原(HPA)，异体HPA同样也会导致血小板输注后迅速被排斥失效，造成免疫性输注无效的问题。

在这种情况下，已有相关研究者着手开发体外诱导成血小板的技术开发，但相关技术需要进行HLA和/或HPA配型来避免生产的血小板出现输注无效的情况，操作复杂，材料来源受限。更重要的是，从获取用于诱导产生血小板的材料到制备所需时间至少在8周以上，处理周期长。此外，在某些情况下，用于诱导产生血小板的材料价格高昂，材料需要从患者身上获取、诱导阶段可控性较差。因此，开发异体来源的、低(无)免疫原性、可以随需随取、随取随用的人造血小板实在必行。

可见，现有技术有待进一步改进。

发明内容

为解决上述技术问题，本申请公开了一种脐带来源的间充质干细胞制备的通用型血小板制剂及方法，能够解决现有技术中制备的血小板通用性差及制备和保存不方便的问题。

本发明的技术方案如下：

一种脐带来源的间充质干细胞制备通用型血小板的方法，其中，所述方法包括：提供脐带来源的间充质干细胞；对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理，得到血小板制剂；其中，所述血小板为低免疫原性的通用型血小板。

其中，对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理之前，所述方法包括：对获取的新鲜脐带进行剥离获取华通氏胶，并在原代培养基上对所述华通氏胶进行原代培养，得到原代培养细胞；对所述原代培养细胞进行扩增，得到扩增后的细胞用于后续操作。

其中：所述扩增后的细胞的细胞代数为P3到P5之间，在所述后续操作进行的前一天，所述增后的细胞细胞融合度大于85％，并培养在37摄氏度，CO₂浓度为5％的培养箱中。

其中，所述对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理的方法包括：对所述脐带来源的间充质干细胞进行成脂诱导处理和血小板诱导处理。

其中，所述成脂诱导处理中的成脂诱导因子包括：胰岛素、谷氨酰胺、吲哚美辛、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、罗格列酮、地塞米松、胎牛血清中的一种或以上的组合。

其中，所述方法包括：在成脂诱导培养基上对所述扩增后的干细胞培养10-20天，得到成脂诱导后的细胞，其中，所述成脂培养基包括：0.1-1.0mM的吲哚美辛、0.2-2.0mM的IBMX、0.2-2.0mM的罗格列酮、0.5-4.0μM的地塞米松、2.0-30μg/ml的胰岛素、2-10mM的谷氨酰胺或体积比例为2.0-15.0％的胎牛血清中的至少一种。