[发明专利]脐带来源间充质干细胞制备的通用型血小板制剂及方法

权利要求书

1.一种脐带来源的间充质干细胞制备通用型血小板的方法，其特征在于，所述方法包括：

扩增脐带来源的间充质干细胞；

对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理，制备血小板制剂；其中，所述血小板为低免疫原性的通用型血小板;对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理之前，所述方法包括：对获取的新鲜脐带进行剥离获取华通氏胶，并在原代培养基上对所述华通氏胶进行原代培养，得到原代培养细胞；对所述原代培养细胞进行扩增，得到扩增后的细胞用于后续操作；所述原代培养基为无血清培养体系；

所述对所述脐带来源的间充质干细胞进行多阶段诱导处理的方法包括：对所述脐带来源的间充质干细胞进行成脂诱导处理和血小板诱导处理；

所述成脂诱导处理为在成脂诱导培养基上对所述扩增后的干细胞培养10-20天，得到成脂诱导后的细胞，其中，所述成脂诱导培养基包括：0.3mM的吲哚美辛、0.6mM的IBMX、0.4mM的罗格列酮、1.0μM的地塞米松、15μg/ml的胰岛素、3mM的谷氨酰胺和体积比例为8％的胎牛血清；

所述血小板诱导处理为在血小板诱导培养基上对所述成脂诱导后的细胞培养4-16天，得到血小板诱导后的细胞，其中，所述血小板诱导培养基包括：70ng/ml的促血小板生成素、10μg/ml的低密度脂蛋白、500μg/ml的转铁蛋白、30μM的复合核糖核苷酸、80μM的β-巯基乙醇、30μg/ml的人白细胞介素3、40μg/ml的人白细胞介素6、20μg/ml的人白细胞介素11、90ng/ml的干细胞生长因子、20μg/ml的胰岛素和体积比例为5％的胎牛血清，所述复合核糖核苷酸为ATP、UTP、CTP和GTP。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述扩增后的细胞的细胞代数为P3到P5之间，在所述后续操作进行的前一天，所述扩增后的细胞细胞融合度大于85％，并培养在37摄氏度，CO₂浓度为5％的培养箱中。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：

对所述诱导处理后的细胞培养液进行离心，收集血小板并进行检测，得到血小板制剂。