[发明专利]一种多效免疫调节功能的免疫细胞库的建立方法

说明书

本发明公开了一种多效免疫调节功能的免疫细胞库的建立方法，步骤如下：采集胎盘组织血；分离单个核细胞并其分成三份；刺激其中一份单个核细胞得到CD4⁺T细胞；分离另一份单个核细胞中的单核细胞；对分离单核细胞得到的上清液进行B淋巴细胞分选，得到B淋巴细胞、T淋巴细胞和NK细胞；将B淋巴细胞采用细胞因子激活得到LAK细胞；将最后一份单个核细胞采用细胞因子进行诱导，分离悬浮淋巴细胞和贴壁DC细胞；将贴壁DC细胞进行肿瘤特异性抗原负载，得到成熟DC细胞；将悬浮淋巴细胞分成两份，一份负载肿瘤特异性抗原得到CTL细胞；另一份采用细胞因子诱导产生NKT细胞；冻存上述细胞。本申请免疫细胞库具有较好的抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及细胞库构建技术领域，具体是一种多效免疫调节功能的免疫细胞库的建立方法。

背景技术

肿瘤是由于机体的免疫功能不足以战胜各种致病因素而造成的，其发生发展与宿主的免疫状态有着密切的关系。传统的肿瘤治疗手段包括手术、化疗和放疗，上述方法不但存在肿瘤迁移与复发的危险，而且具有严重的损伤正常组织和免疫功能的副作用。自20世纪80年代以来，细胞免疫疗法被美国国立卫生研究院列为除上述三种方法以外的第四大肿瘤治疗模式。

细胞免疫疗法主要是以免疫活性细胞为载体，通过体内或体外刺激免疫细胞，分泌细胞因子调节其他免疫细胞的功能或直接杀伤肿瘤细胞。目前，用于临床治疗的免疫细胞主要有淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、肿瘤浸润的淋巴细胞(TIL细胞)、树突状细胞(DC)、自然杀伤细胞(NK)等。

目前临床上采用免疫细胞治疗肿瘤的过程中，免疫细胞主要来源于患者，但肿瘤患者的免疫功能受损，杀伤肿瘤细胞能力较低，尽管采用细胞因子激活，免疫细胞杀伤肿瘤细胞的能力得到增强，但依然低于健康人免疫细胞杀伤肿瘤细胞的能力。为了克服上述缺陷，在健康状态下，建立免疫细胞库，将高质量的免疫细胞储存起来，待未来有需要时进行自体免疫细胞治疗，是一种非常好的方法。但建立免疫细胞库目前存在以下问题，由于我国人口基数较大，针对每个健康人建立个体化的免疫细胞贮存库需要投入大量的人力、物力、财力，从而实现对免疫细胞的采集、分离和存储，所以，如果能找到一种突破免疫细胞只能进行自体治疗的瓶颈的方法，将具有重要的临床意义。

发明内容

本发明就是为了解决现有技术中存在的问题，所提出了一种多效免疫调节功能的免疫细胞库的建立方法。

本发明的一种多效免疫调节功能的免疫细胞库的建立方法，是采用了如下的技术方案。

一种多效免疫调节功能的免疫细胞库的建立方法，包括以下步骤：

S1.采集胎盘组织血；

S2.从胎盘组织血中分离单个核细胞；并将所得单个核细胞分成三份；

S3.将步骤S2获得的其中一份单个核细胞采用肿瘤特异性抗原进行刺激得到CD4⁺T细胞；

S4.分离步骤S2获得的另一份单个核细胞中的单核细胞；

S5.对步骤S4分离单核细胞得到的上清液进行B淋巴细胞分选，得到B淋巴细胞以及T淋巴细胞和NK细胞的混合物；

S6.将步骤S5得到的B淋巴细胞分为两份，其中一份B淋巴细胞采用细胞因子进行激活，得到LAK细胞；

S7.将最后一份单个核细胞采用细胞因子进行诱导，分离悬浮的淋巴细胞和贴壁的DC细胞；

S8.将步骤S7获得的贴壁DC细胞进行肿瘤特异性抗原负载，得到成熟DC细胞；

S9.将步骤S7获得的悬浮淋巴细胞分成两份，一份负载肿瘤特异性抗原得到CTL细胞；另一份采用细胞因子诱导产生NKT细胞；

S10.向步骤S1-S9中得到的免疫细胞中加入冻存液进行冻存，并编码入库。