[发明专利]一种同时过表达N个miRNA的方法

权利要求书

1.一种同时过表达N个miRNA的方法，其特征在于，N个miRNA为水稻miR-397a、miR-398a、miR-408、miR-528中的至少2个，所述方法包括以下步骤：

S1、针对目标miRNA，设计PCR引物，以水稻基因组DNA为模板，PCR扩增获得包括编码目标miRNA茎环结构的前体序列片段，编码miR-397a的前体序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码miR-398a的前体序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码miR-408的前体序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，编码miR-528的前体序列的核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示；

S2、将N个miRNA的前体序列片段进行拼接，得到拼接序列；

S3、将拼接序列插入到表达质粒的多克隆位点，所述表达质粒的启动子为Ubi，得到过表达载体；

S4、将过表达载体转入受体材料中，N个miRNA同时过表达。

2.如权利要求1所述的同时过表达N个miRNA的方法，其特征在于，步骤S2中，利用重叠PCR技术对N个miRNA的前体序列片段进行拼接。

3.如权利要求1所述的同时过表达N个miRNA的方法，其特征在于，所述表达质粒为pCUbi1390。

4.如权利要求3所述的同时过表达N个miRNA的方法，其特征在于，N个miRNA为水稻miR-397a、miR-398a、miR-408、miR-528，所述过表达载体包括双元载体pCUbi1390以及插入在pCUbi1390多克隆位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的拼接序列。