[发明专利]一种筛查羊乳中磺胺类药物残留的方法

权利要求书

1.一种筛查羊乳中磺胺类药物残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，将羊乳用乙酸和乙腈的混合水溶液，涡旋后加入无水硫酸镁和无水乙酸钠依次涡旋、振荡，羊乳、所述混合水溶液、无水硫酸镁和无水乙酸钠的比例为（14-16）g：（9-11）mL：（5.5-6.5）g：（1.4-1.5）g，所述乙酸和乙腈的混合水溶液中，乙酸的体积占乙腈的1%，乙酸和乙腈的总体积与水的体积之比为21:4，然后将所得的混合液静置后得到上清液A；

步骤2，将上清液A的pH调整至2-6，之后加入分散固相吸附剂进行涡旋，分散固相吸附剂与羊乳的质量比为0.08：（14-16），离心后分离所得的上清液B，再加入洗脱液，洗脱液为NH₄OH和甲醇的混合液，NH₄OH和甲醇的体积比为1:100，得到混合体系；

所述分散固相吸附剂按如下过程制得：

将多孔石墨烯的分散液逐滴滴至多壁碳纳米管的分散液中，震荡20-45min并超声处理0.5-1 h，重复3-5次，多壁碳纳米管的纯度＞97%，直径为10-30nm，长度为5-15 μm，多孔石墨烯和多壁碳纳米管的质量比为（550-650）：（275-325），得到混合体系a，再将混合体系a抽滤所得的滤饼干燥，得到分散固相吸附剂；

所述多孔石墨烯的分散液按如下过程制得：

按（0.8-1.2）g：（20-25）mL的比例，将2000-3000目的石墨粉加入浓硫酸中，然后降温至0-4℃，在搅拌的情况下加入KMnO₄，KMnO₄与所述石墨粉的质量比为（0.8-1.2）：（2.8-3.2g），直到所得混合溶液为糊状深绿色，再添加超纯水，用H₂O₂溶液去除未反应完的KMnO₄，过滤后洗涤、干燥，所得产物在600-1000W下微波辐照5-10s，得到多孔石墨烯，将多孔石墨烯加入到乙醇中，乙醇和多孔石墨烯的比例为（150-250）mL：（550-650）mg，依次搅拌20-45min、超声20-45min后获得多孔石墨烯的分散液；

所述多壁碳纳米管的分散液按如下过程制得：

在乙醇中添加十六烷基三甲基溴化铵超声20-45 min后添加多壁碳纳米管，乙醇、十六烷基三甲基溴化铵和多壁碳纳米管的比例为（150-250）mL：（15-25）mg：（275-325）mg，连续超声3-4 h得到多壁碳纳米管的分散液；

步骤3，将混合体系混合均匀后离心，得到上清液C，将上清液C蒸干后用甲酸铵水溶液复溶，得到待测液a，将待测液a依次用超高效液相色谱和四极杆静电场轨道离子阱质谱进行分析，当待碎裂的离子响应强度达到强度阈值8.3×10⁴时，将碎裂的目标分析物送往高能碰撞解离碰撞池，通过三个不同的碰撞能量分别进行碰撞，碰撞能量分别为17.5 eV、35.0 eV和52.5 eV，得到若干个目标分析物形成的若干组信息；

超高效液相色谱的条件如下：

柱温为30-40℃，流动相A为水、甲酸和甲酸铵的混合溶液，其中甲酸体积占混合溶液体积的1%，甲酸铵的浓度为4 mmol/L，流动相B由甲酸和甲酸铵的甲醇溶液组成，其中甲酸占甲酸和甲酸铵的甲醇溶液体积的0.1%，甲酸和甲酸铵的甲醇溶液中甲酸铵的浓度为4mmol/L；

梯度洗脱程序为：0-1 min内，流动相A的比例为100%，1-7 min内，流动相A的比例由100%线性减小至0，7-12 min内，流动相A的比例为0，12-13 min内，流动相A的比例由0线性增加至100%，13-15 min内，流动相A的比例为100%，流速为200-400μL/min；

四极杆静电场轨道离子阱质谱的条件如下：

离子源为ESI+，鞘气流速为13-15L/min，辅助气流速为2.5-3.5L/min，离子源温度:40-60℃，毛细管温度: 310-330℃，一级扫描方式为全扫描模式，全扫描模式下分辨率设定65000-75000FWHM，自动增益控制的目标值为0.8×10⁷-1.2×10⁷，最大注入时间为200-300ms，动态背景扣除设定为8-12s，二级扫描方式为数据依赖扫描，分辨率设定为15000-20000FWHM，AGC定为4.5×10⁶-5.5×10⁶，出峰后的触发时间为3-6 s，最大注入时间110-130ms，动态背景扣除设定为8-12s；

将步骤1中的羊乳替换为不含磺胺类药物的羊乳，然后重复步骤1-2，得到混合体系b，在混合体系b中加入含有待分析的磺胺类药物标准物质的标准溶液，得到待测液b，将待测液b依次用超高效液相色谱和四极杆静电场轨道离子阱质谱进行分析，得到磺胺类药物标准物质形成的若干组信息；

所述的每组信息均包括定量离子色谱峰和相应的保留时间、以及分子离子质荷比、碎片离子质荷比；

步骤4，将每一种磺胺类药物对应的每组信息与目标分析物对应的每组信息进行比对，得到羊乳中每一种磺胺类药物的定量离子色谱峰的峰面积，最后根据每一个磺胺类药物标准物质的基质匹配混合标准工作曲线求出羊乳中每一种磺胺类药物的浓度。

2.根据权利要求1所述的筛查羊乳中磺胺类药物残留的方法，其特征在于，步骤4在建立每一个磺胺标准物质的基质匹配混合标准工作曲线时，对应标准物质在混合溶液中的浓度为1 -500μg/L。