[发明专利]蓝湖柏的组织培养快繁方法

说明书

本发明涉及蓝湖柏的组织培养快繁方法，选择蓝湖柏母株的新稍为外植体，用水冲洗后修剪至2～3cm长浸泡到800～1000倍50％多菌灵可湿性粉剂溶液中15～30min，流水冲洗后转入无菌的组培瓶中，移到超净工作台消毒，切掉两端与消毒剂接触的部分；将上述茎段接种到诱导培养基中进行腋芽诱导培养，直至外植体腋芽萌发长成无菌苗；在超净工作台将上述获得的无菌苗从基部剪下接种到增殖培养基中培养，培养长出大量丛生芽；无根苗接种到生根培养基上进行生根培养；当根长到1.5～2cm时，将组培瓶打开加水锻炼，炼苗以适应外部环境，移栽到基质中，置于温室培养。月繁殖系数达6.2倍，生根率达97％，移栽成活率达95％以上。

技术领域

本发明涉及一种蓝湖柏的组织培养快繁方法。

背景技术

蓝湖柏又名日本花柏“波尔瓦”(Chamaecyparis pisifera“Boulevard”)，原产日本，为柏科扁柏属常绿针叶灌木或小乔木，树高最高可达6m。树冠扩展呈金字塔型，株型密实直立，树姿优美，春夏秋叶色银蓝色，冬季银灰绿蓝色，针叶柔软不刺手。蓝湖柏可塑性强，可通过修剪做成球型、棒棒糖造型等，适用于园景色块、矮篱，可作庭院、花园的混合花镜，与红枫、观赏草等搭配种植，也可用作盆景，适应范围广，适于东北、华北和亚热带地区，是非常优秀的彩色树种，具极高观赏价值。

蓝湖柏常规繁殖以扦插为主，而传统的扦插繁殖存在受季节限制、繁殖系数低、成本高等缺点，不能满足国内市场对种苗的需求。利用组织培养技术进行蓝湖柏的快繁，可以提高繁殖效率，降低成本，还能保留母株的优良性状，提高种苗的质量。因此，建立蓝湖柏的组培快繁体系，具有很好的市场及产业化应用前景。目前国内外尚未对蓝湖柏离体再生研究的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种蓝湖柏的组织培养快繁方法，旨在解决蓝湖柏繁殖系数低、繁殖周期长、成本高等问题。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

蓝湖柏的组织培养快繁方法，特定是：包括如下步骤：

1)外植体的选择与处理，选择蓝湖柏母株的新稍为外植体，用水冲洗后修剪至2～3cm长浸泡到800～1000倍50％多菌灵可湿性粉剂溶液中15～30min，然后流水冲洗1～2h后转入无菌的组培瓶中，移到超净工作台，消毒顺序依次为75％的酒精消毒30～45s，0.1％的HgCl₂溶液消毒12～18min，无菌水清洗6～8次，期间不断晃动组培瓶，最后在无菌滤纸吸干表面水分后，切掉两端与消毒剂接触的部分，外植体长度为0.8～1.2cm；

2)无菌苗的获得，将步骤1)的茎段接种到诱导培养基中进行腋芽诱导培养，直至外植体腋芽萌发长成1～2cm的无菌苗，诱导培养基以WPM为基本培养基，添加6-BA1.0～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7.0～7.5g/L；

3)增殖培养，在超净工作台将步骤2)获得的无菌苗从基部剪下接种到增殖培养基中培养，经过30～40天培养长出大量丛生芽，增殖培养基以WPM为基本培养基，添加6-BA1.0～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7.0～7.5g/L；

4)生根培养，步骤3)获得的生长一致的无根苗接种到含有0.1～0.5mg/LNAA、IBA的WPM培养基上进行生根培养；

5)炼苗移栽，当根长到1.5～2cm时，将组培瓶打开加水锻炼，炼苗3～5天以适应外部环境，将根部培养基清洗干净后，移栽到基质中，置于温室培养。

进一步地，上述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其中，步骤1)，75％的酒精消毒时间为45s，0.1％的HgCl₂溶液消毒时间为15min，外植体长度为0.8～1.2cm。