[发明专利]蓝湖柏的组织培养快繁方法

权利要求书

1.蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)外植体的选择与处理，选择蓝湖柏母株的新稍为外植体，用水冲洗后修剪至2～3cm长浸泡到800～1000倍50％多菌灵可湿性粉剂溶液中15～30min，然后流水冲洗1～2h后转入无菌的组培瓶中，移到超净工作台，消毒顺序依次为75％的酒精消毒30～45s，0.1％的HgCl₂溶液消毒12～18min，无菌水清洗6～8次，期间不断晃动组培瓶，最后在无菌滤纸吸干表面水分后，切掉两端与消毒剂接触的部分，外植体长度为0.8～1.2cm；

2)无菌苗的获得，将步骤1)的茎段接种到诱导培养基中进行腋芽诱导培养，直至外植体腋芽萌发长成1～2cm的无菌苗，诱导培养基以WPM为基本培养基，添加6-BA1.0～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7.0～7.5g/L；

3)增殖培养，在超净工作台将步骤2)获得的无菌苗从基部剪下接种到增殖培养基中培养，经过30～40天培养长出大量丛生芽，增殖培养基以WPM为基本培养基，添加6-BA1.0～3.0mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7.0～7.5g/L；

4)生根培养，步骤3)获得的生长一致的无根苗接种到含有0.1～0.5mg/LNAA、IBA的WPM培养基上进行生根培养；

5)炼苗移栽，当根长到1.5～2cm时，将组培瓶打开加水锻炼，炼苗3～5天以适应外部环境，将根部培养基清洗干净后，移栽到基质中，置于温室培养。

2.根据权利要求1所述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：步骤1)，75％的酒精消毒时间为45s，0.1％的HgCl₂溶液消毒时间为15min，外植体长度为0.8～1.2cm。

3.根据权利要求1所述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：步骤2)，诱导培养基以WPM为基本培养基，添加6-BA3.0mg/L、NAA0.4mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7g/L，培养时间为28天。

4.根据权利要求1所述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：步骤3)，增殖培养基以WPM为基本培养基，添加6-BA2.0mg/L、NAA0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂7g/L，培养时间为30天。

5.根据权利要求1所述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：步骤4)，生根培养基以WPM为基本培养基，添加NAA0.1mg/L、IBA0.1mg/L、蔗糖20g/L、琼脂7g/L，培养时间为25天。

6.根据权利要求1所述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：步骤2)、步骤3)、步骤4)中培养条件为，温度25±1℃，光照强度2000～2200lx，光照时间12～14h/d，所用培养基的pH为5.8～6.0。

7.根据权利要求1所述的蓝湖柏的组织培养快繁方法，其特征在于：步骤5)，根长为2cm时进行炼苗，移栽基质的体积配比为泥炭：珍珠岩＝2:1。