[发明专利]一种基于高效液相色谱三重四级杆串联质谱检测生物样本中口服抗凝血药含量的方法

权利要求书

1.一种基于高效液相色谱三重四级杆串联质谱检测生物样本中口服抗凝血药含量的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)标准品溶液的配制：使用50％～90％甲醇水溶液将标准品储备液配制成混合标准品工作液；将所述混合标准品工作液配制成浓度0.2-50μg/mL的标准品溶液；

(b)内标液的配制：使用蛋白质沉淀剂稀释同位素内标物储备液，配制成浓度为5～50ng/mL的混合内标工作液；

(c)生物样本的预处理：将待测生物样本离心后得到上清液；

(d)吸取混合内标工作液于96孔蛋白沉淀板，分别加入生物样本、标准品溶液、质控品工作液混合后，静置，放置在96孔负压装置上，抽滤，然后取上清液进行高效液相色谱三重四级杆串联质谱；使用的分析色谱柱为C18色谱柱，以流动相A和流动相B混合进行梯度洗脱；所述流动相A为含有0.1～0.5％甲酸水溶液；流动相B为0～0.5％甲酸甲醇溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序为：0.2min时，流动相B15％；

0.5～0.8min时，流动相B 70％；

1.00～1.50min时，流动相B升至90％；

1.51min时，流动相B15％；

4min时，流动相B15％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30-40℃；流动相流速为0.2～0.6mL/min；进样量为2～10μL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白质沉淀剂包括甲醇或乙腈；优选为甲醇。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(c)中的离心条件为离心速度500～3000rpm，离心10～30min；

步骤(d)中所述混合内标工作液与生物样本、标准品溶液、质控品工作液混合的体积比为20～100：1～25。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括质控品工作液的配制，包括使用50％～90％甲醇水溶液稀释质控品储备液，分别配制低浓度、中浓度、高浓度的混合质控品工作液。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述标准品储备液和质控品储备液为用DMSO溶解达比加群、利伐沙班、阿哌沙班和艾多沙班标准品配制而成。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述同位素内标物为氘代同位素内标，包括达比加群-d3、利伐沙班-d4、阿哌沙班-d3和艾多沙班-d6。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，质谱采用电喷雾离子源和多反映监测的扫描模式；

质谱条件为电喷雾质谱正离子模式；离子源温度：300～600℃；离子源电压：4500～5000V；碰撞气：9～10unit；气帘气：40～50psi；GS1:50～60psi；GS2：50～60psi。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述生物样本包括血浆和/或血清；优选地，所述生物样本为血浆。