[发明专利]一种传染性造血器官坏死病疫苗及其病毒在胖头鱥肌肉细胞上扩增的方法

说明书

本发明公开了一种传染性造血器官坏死病疫苗及其病毒在胖头鱥肌肉细胞上扩增的方法。本发明提供了体外增殖传染性造血器官坏死病毒的方法，包括如下步骤：将传染性造血器官坏死病毒按照MOI值为0.001接种于胖头鱥肌肉细胞，培养，收集上清液，实现在胖头鱥肌肉细胞上增殖传染性造血器官坏死病毒。本发明以MOI＝0.001的浓度将IHNV接种FHM细胞，所需收毒时间短、病毒滴度高且稳定。以该增殖方案大规模扩增病毒并用BPL及甲醛制备灭活疫苗，结果显示疫苗对虹鳟的免疫效果好，相对免疫保护效率可达80％以上。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种传染性造血器官坏死病疫苗及其病毒在胖头鱥肌肉细胞上扩增的方法。

背景技术

传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)属弹状病毒科(Rhabdoviridae)，诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus)，为单股负链RNA病毒，是传染性造血器官坏死病(Infectious hematopoietic necrosis,IHN)的病原。IHN首次于20世纪50年代在美国暴发，80年代传入中国，现今已广泛分布于全球许多鲑鳟养殖国家。该病是一种可导致鲑科幼鱼死亡率高达100％的病毒病，是世界动物卫生组织(OfficeInternational Des Epizooties，OIE)规定必须申报的动物疫病，是我国二类疫病。该病对全球鲑鳟养殖业造成了巨大的经济损失和威胁，疫苗免疫是防控该病的最有效手段，但是已报道的IHN疫苗大多数停留在实验室水平并未商业化，目前仅加拿大有上市的IHN疫苗(Apex-IHN)而其他国家仍无任何形式的商业化IHN疫苗。

灭活疫苗由于抗原含量高、质量稳定、异源物质少、安全性高、生产成本低等优点而成为防控病毒性疾病的首选疫苗产品。不同病毒具有不同的体外增殖方案，而稳定高效的体外增殖方案是制备细胞培养灭活疫苗的前提。OIE推荐使用胖头鱥肌肉细胞(Musclecells of Fathead minnow，FHM)进行IHNV的体外增殖。前期研究发现在IHNV传代培养的过程中，当接种剂量过大时，会出现错误包装形成大量的IHNV缺陷病毒，而缺陷病毒不具备繁殖能力，随着传代次数的增加，缺陷病毒会快速累积，最终导致IHNV无法继续进行体外传代；当接种剂量过小时，病毒增殖所需时间较长，延长了生产周期，增加污染概率，进而提高疫苗生产成本。

因此，选用一种合适的接种方案是目前对IHNV体外增殖的关键。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种体外增殖传染性造血器官坏死病毒的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：将传染性造血器官坏死病毒按照MOI值为0.01～0.00001接种于胖头鱥肌肉细胞，培养，收集上清液，实现在胖头鱥肌肉细胞上增殖传染性造血器官坏死病毒。

上述方法中，所述培养的时间为3～5天。

上述方法中，所述培养的温度为15℃。

上述方法中，优选条件如下：所述培养的时间为4天、所述培养的温度为15℃，所述MOI值为0.001。

本发明的另一个目的是一种制备传染性造血器官坏死病疫苗的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：

将传染性造血器官坏死病毒按照MOI值为0.01～0.00001接种于胖头鱥肌肉细胞，培养，收集上清液，得到增殖传染性造血器官坏死病毒；

2)用增殖传染性造血器官坏死病毒制备传染性造血器官坏死病疫苗。

上述方法中，所述培养的时间为3～5天。

上述方法中，所述培养的温度为15℃。

上述方法中，优选条件如下：所述培养的时间为4天、所述培养的温度为15℃，所述MOI值为0.001。