[发明专利]一种可清除体内免疫球蛋白A的重组融合蛋白酶及其制备方法和在治疗IgA肾病中的应用

说明书

本发明提供基于AK183蛋白酶的重组融合蛋白及其在治疗IgA肾病及其它IgA复合物沉积介导的相关疾病中的应用，所述的重组融合蛋白结构中包含人类共生菌蛋白酶AK183活性区域和人免疫球蛋白片段；所述的人免疫球蛋白片段位于所述蛋白酶AK183活性区域的N端。本发明还提供制备所述重组融合蛋白的方法。本发明的重组融合蛋白通过将天然AK183蛋白酶重组融合人免疫球蛋白片段，具有血浆半衰期延长、可有效清除循环及肾脏IgA复合物，及极大程度降低蛋白酶对人体存在免疫原性的副作用等综合优势，适合用于特异性治疗IgA肾病及其它IgA复合物沉积介导的相关疾病。

技术领域

本发明涉及融合蛋白重组合成领域，具体涉及一种人工合成的具有蛋白酶活性的多肽，及其合成方法，和利用该多肽的药物酶学活性来治疗IgA肾病及其它由多聚IgA复合物引起的疾病的方法。

背景技术

IgA肾病是目前世界上最常见的原发性肾小球疾病之一，尤其在东亚地区可占肾穿刺活检诊断原发性肾小球肾炎的40％-50％,30％-40％以上的患者在发病20～30年后进展至终末期肾病—尿毒症^1,2，给患者和社会带来沉重的负担。目前针对IgA肾病尚缺乏特异性的治疗。临床上多用RAS阻断剂为基础的支持治疗，以减缓肾功能恶化。对于支持治疗无效的患者予以联合激素免疫抑制剂治疗。但激素免疫抑制剂的使用长期疗效不佳且给患者带来严重的副作用^3,4。

近年来药物研究的重点在于开发有效及低副作用的治疗药物。主要方向包括研发降低及特异性清除肾脏IgA沉积的药物。其中包括系统性降低免疫反应及IgA产生的治疗，以及减轻IgA诱导的补体活化。IgA肾病由循环IgA1复合物在肾小球沉积导致，人体及其病原或共生微生物均具备清除IgA的生物机制。IgA1由两条重链和两条轻链组成。Fab和Fc段之间存在一个铰链区(HR)⁶，是微生物切割IgA1的作用位点。多种病原及共生微生物均具备此类蛋白酶用于对抗人体免疫。其中AK183为来源于人体肠道共生菌梭状芽胞杆菌(Clostridium)的IgA蛋白酶。此项发明旨在利用人体对此共生菌的优良耐受性来开发一种基于其AK183蛋白酶的药物，并通过重组融合蛋白技术来进一步优化药物半衰期以有效清除循环IgA及其肾脏沉积。此融合蛋白药物可望具备低免疫原性、高特异性和长效性的特点，用于快速控制进展性IgA肾病以稳定肾功能。

发明内容

鉴于上述背景，本发明期望利用生物重组技术的方法来改造共生菌来源的IgA酶，以达到优良的药理活性及药代动力学特性，以及用于特异性治疗IgA肾病(包括原发和继发性IgA肾病)及广泛的由致病性多聚IgA复合物沉积引起的疾病的方法。

本发明的一方面目的在于：提供一种可清除致病性IgA1复合物的融合蛋白酶，以实现蛋白酶的超长血液药物半衰期，从而延长体内清除致病性IgA1复合物的药效。

本发明的另一个目的是提供利用重组融合蛋白治疗IgA肾病(包括原发和继发性IgA肾病)，以及广泛的由致病性多聚IgA复合物引起的疾病的方法。

本发明的再一个目的是提供制备所述可清除致病性IgA1复合物的融合蛋白酶的方法。

本发明的上述目的通过以下技术方案实现：

首先，本发明第一个方面提供一种重组融合蛋白，其结构中包含人类共生菌蛋白酶AK183活性区域和人免疫球蛋白片段；所述的人免疫球蛋白片段位于所述蛋白酶AK183活性区域的N端，所述的人免疫球蛋白片段的氨基酸序列与SEQ ID No.1所示序列有至少90％相同，优选有至少95％相同，最优选100％相同；所述的蛋白酶AK183活性区域来自与SEQ IDNo.3所示序列有至少90％相同的氨基酸序列，优选有至少95％相同，最优选100％相同。本发明所述的重组融合蛋白命名为“Fc-AK183”。本发明所述的重组融合蛋白中，所述的AK183活性区域部分可以提供药物活性中心以降解IgA，所述的人免疫球蛋白片段可增强药物与人体兼容性以及延长药物半衰期。