[发明专利]一种用于胱硫醚γ裂解酶检测的荧光探针NI-CO-HCYS

说明书

一种用于胱硫醚γ裂解酶检测的荧光探针NI‑CO‑HCYS。本发明提供了一种可用于检测胱硫醚γ裂解酶(Cystathionine gama lyase,简称CSE)的荧光探针。该探针以4氨基‑1，8‑萘酰亚胺为荧光母体,通过一种氨基甲酸酯结构构建的linker连接酶识别位点高半胱氨酸。CSE可以选择性识别与切断NI‑CO‑HCYS,生成利用反应物与产物的荧光差别实现选择性地检测胱硫醚γ裂解酶。该探针可以用于定性及定量动物细胞及组织乃至活体中CSE含量，以及用于CSE抑制剂的筛选。

技术领域

本发明涉及荧光探针领域，具体涉及一种可用于检测胱硫醚γ裂解酶(Cystathionine gama lyase,简称CSE)的荧光探针NI-CO-HCYS。该探针以4氨基-1，8-萘酰亚胺为荧光母体,通过一种氨基甲酸酯结构构建的linker连接酶识别位点高半胱氨酸。CSE可以选择性识别与切断NI-CO-HCYS。利用反应物与产物的荧光差别实现选择性地检测胱硫醚γ裂解酶。

背景技术

胱硫醚γ裂解酶(Cystathionine gama-lyase,CSE EC4.4.1.1)属于裂解酶类，催化胱硫醚γ位裂解，在脱去α酮戊二酸和NH3后，生成L-半胱氨酸,该步骤是动物体中甲硫氨酸生物合成中的倒数第二个步骤。此外,胱硫醚γ裂解酶还是产生硫化氢的主要途径,硫化氢被证实是细胞信号通路中信号转导过程中的重要分子。因此在动物体中检测及定量CSE具有重要意义。CSE抑制剂全新的化学结构、良好的作用效果和独特的作用靶点已引起国内外研究者广泛的兴趣。

荧光探针是有效检测生命体内CSE的手段之一，相比吸光度法,液相质谱法,同位素标记法具有检测便捷灵敏的优势。一个具有应用前景的荧光探针应具有作用前后荧光变化明显、对目标分子响应快、选择性好、合成简单等优点。目前还没有应用于检测CSE的荧光探针,开发CSE的荧光探针具有很大挑战性。

发明内容

本发明就是针对上述问题，提供了一种可用于选择性检测细胞内CSE的荧光探针NI-CO-HCYS，此探针可以在生理条件下选择性地与CSE作用，作用后荧光改变明显。运用该探针可以进行CSE的活性检测以及抑制剂筛选。

本发明采用如下技术方案：

本发明提供了一种可用于检测胱硫醚γ裂解酶(Cystathionine gama-lyase,CSE)的荧光探针NI-CO-HCYS。NI-CO-HCYS以4氨基-1，8-萘酰亚胺为荧光母体,通过一种氨基甲酸酯结构构建的linker连接酶识别位点高半胱氨酸。CSE可以选择性识别与切断NI-CO-HCYS。利用反应物与产物的荧光差别实现选择性地检测胱硫醚γ裂解酶。

合成的探针化合物的结构用代号NI-CO-HCYS表示。所述荧光探针的结构式Ⅰ如下。

结构代号：NI-CO-HCYS。

R可以为氢原子、或也可以为具有1-10个碳原子的取代烷基、或苯基、或取代苯基，取代苯基上的取代基为C1-C5的烷基，苯基上取代基的个数为1-5个。

所述的荧光探针的具体制备方法为：

1)在干燥乙醇50ml中加入4氨基-1,8萘二甲酸酐(cas：6492-86-0)2.13g，搅拌至全溶。加入0.87g正丁胺(cas：109-73-9)，加热回流12小时，回流12h，乙醇和多余正丁胺旋干，硅胶柱层析分离，洗脱梯度为(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)。得到化合物1产率约为80％。得到后即投入使用。