[发明专利]一种用于胱硫醚γ裂解酶检测的荧光探针NI-CO-HCYS

权利要求书

1.一种荧光探针NI-CO-HCYS，其特征在于：所述的荧光探针的结构为结构I所示，

结构代号：NI-CO-HCYS；

R可以为氢原子、或也可以为具有1-10个碳原子的烷基、或苯基、或取代苯基，取代苯基上的取代基为C1-C5的烷基，苯基上取代基的个数为1-5个，优选1-2个。

2.一种权利要求1所述的荧光探针的应用，其特征在于：所述的荧光探针可以用于胱硫醚γ裂解酶(Cystathionine gama lyase,简称CSE)的检测。

3.根据权利要求2所述的荧光探针的应用，其特征在于：所述的荧光探针可以用于检测水溶液中的胱硫醚γ裂解酶。

4.根据权利要求2所述的荧光探针的应用，该探针可以用于水溶液中胱硫醚γ裂解酶的抑制剂筛选。

5.根据权利要求2所述的荧光探针的应用，该探针可以用于动物细胞、动物组织及动物活体中的一种或二种以上胱硫醚γ裂解酶的定量检测和/或定性检测。

6.根据权利要求2或3所述的荧光探针的应用，该探针可以用于液体(如：水)中胱硫醚γ裂解酶的定量检测和/或定性检测。

7.根据权利要求2-6任一所述的荧光探针的应用，其特征在于：所述的荧光探针NI-CO-HCYS应用于检测CSE时，其荧光变化是因为生成具有结构II的化合物；

R可以为氢原子、或也可以为具有1-10个碳原子的取代烷基、或苯基、或取代苯基，取代苯基上的取代基为C1-C5的烷基，苯基上取代基的个数为1-5个，优选1-2个。

8.一种权利要求1所述的荧光探针的合成方法，其具体制备步骤如下，

1)在干燥乙醇40-60ml中加入4氨基-1,8萘二甲酸酐2-2.2g，搅拌至溶解；加入0.8-1g正丁胺，加热回流8-24小时，乙醇和多余正丁胺旋干，硅胶柱层析分离，洗脱梯度为(石油醚：乙酸乙酯＝2:1-6：1，v/v)；得到化合物1；

2)在冰浴(温度-4℃-4℃，优选-2℃-0℃)的10-20ml无水二氯甲烷中，加入0.28-0.3g三光气，加1-3mg三乙胺搅拌，促使三光气分解，之后滴加0.24-0.28g 4氨基-1,8萘酰亚胺的10-20ml二氯甲烷溶液，继续搅拌，点板监测反应，待其完全转化，继续加入0.27-0.29gmethyl N-(tert-butoxycarbonyl)-S-(2-hydroxyethyl)homocysteinate，继续搅拌，点板监测反应，反应完全后，硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝16:1-25：1，v/v)，得到产物2；

3)在冰浴(温度范围-4℃-4℃，优选-2℃-0℃)的40-60ml无水二氯甲烷中，溶解产物2，滴加三氟乙酸20-28mg，室温下反应完全后，缓慢滴加碳酸氢钠饱和溶液至不再冒泡即停止。硅胶柱层析分离(二氯甲烷：甲醇＝16:1-25：1，v/v),得到产物。